您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
Nus·Tag文献资料
-
PHD2基因原核表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达
目的 构建PHD2基因原核表达载体pET-43.1b(+)-PHD2,实现Nus-PHD2融合蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达.方法 用Sac Ⅰ酶切pET-43.1b(+)制备线性化载体,设计与线性化载体两端具有至少15个同源序列的特异性引物,以真核重组质粒pCMV6-Entry-EGLN1为模板,PCR法扩增PHD2目的基因.采用In-Fusion技术构建原核表达载体pET-43.1b(+)-PHD2,并将其导入大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达.用SDS-PAGE和Western blot分析并鉴定表达出的融合蛋白.用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白.结果 成功构建了PHD2原核表达载体;SDS-PAGE结果显示融合蛋白以可溶性形式表达;Western blot鉴定表明融合蛋白可以与PHD2单克隆抗体特异性结合.结论 实现了Nus-PHD2融合蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达,为PHD2生物学功能的研究奠定了基础.
关键词： PHD2 In-Fusion技术 Nus·Tag 大肠埃希菌
