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复合型菌剂对鸡白痢菌的抑制作用及其各菌在鸡体内定居情况
利用由鸡粪肠球菌、鸡非致病性大肠埃希菌、芽胞杆菌、酵母菌和乳酸菌组成的复合菌剂在体外与鸡白痢沙菌门作用,结果表明,鸡白痢沙门菌生长明显受到抑制,抑制率达90%以上.并且还测定其各菌的有关生物特性以及雏鸡体内的定居情况:胆盐耐受范围在1.2%～1.4%之间;苯酚耐受范围在0.1%～0.2%之间;耐酸范围在pH3.0～2.5之间;在雏鸡体内除芽胞杆菌为过路菌外,其他菌均可定居于盲肠、中肠、肌胃、素囊中.
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鸡白痢沙门菌减毒疫苗候选株冻存条件的优化及冻存菌株的遗传稳定性
目的 优化鸡白痢沙门菌减毒疫苗候选株冻存条件,并检测冻存菌株的遗传稳定性.方法 采用平板活菌计数方法检测添加不同保护剂(5％蔗糖水溶液、5％蔗糖脱脂乳液、5％蔗糖脱脂奶粉液、1.5％明胶水溶液),并于不同温度(常温、4℃、-20℃)及不同保存时间(常温冻存0、15和30 d,4及-20℃冻存0、30、60、90、120、210和540 d)条件下冻存的减毒疫苗候选株S06004△spiC的活菌数,确定佳冻存条件.检测经体内、外传代5、10、15、20代及原代减毒疫苗候选株S06004△spiC的生化特性,并对经体内、外传代20代及原代减毒疫苗候选株S06004△spiC进行PCR及测序鉴定.结果 佳冻存条件为:添加5％蔗糖脱脂奶粉溶液,于-20℃下冻存,保存时间至少可达1.5年.经体内、外传代后,减毒疫苗候选株S06004△spiC的生化特性与原代一致,其目的基因序列均未发生变化.结论 成功优化了鸡白痢沙门菌减毒疫苗候选株的冻存条件,该候选株具有良好的稳定性,为后期研究其安全性及免疫学特性奠定了基础.
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SKLZ△spiC鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株的遗传稳定性分析
目的 分析鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株SKLZ△spiC的遗传稳定性.方法 将疫苗株SKLZ△spiC与其亲体株S06004进行体外混合培养、体内共同感染,同时将重组质粒pMD20-spiC电转化导入疫苗株SKLZ△spiC,连续传至20代后,进行PCR及测序鉴定.结果 在体外混合培养、体内混合感染条件下,疫苗株SKLZ△spiC均无法从野生株S06004获得靶基因spiC;疫苗株SKLZ△spiC无法从外源质粒获得靶基因spiC.结论 疫苗株SKLZ△spiC具有良好的遗传稳定性.
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鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用
目的 进行鸡白痢沙门菌SpiC蛋白原核表达并建立以SpiC蛋白为检测抗原的间接ELISA.方法 以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增384 bp的spiC基因.将spiC基因克隆至原核表达载体pET30a中,构建重组原核表达质粒pET30a-spiC,再转化到表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定,纯化His-SpiC蛋白,建立SpiC蛋白为检测抗原的间接ELISA并检测临床血清样品.结果 通过对诱导后重组菌裂解产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,重组菌可以表达相对分子质量(Mr)约19 200的可溶性重组蛋白His-SpiC.重组蛋白GST-SpiC免疫无特定病原体鸡,所获得的高免血清能识别重组蛋白His-SpiC,表明体外表达的重组蛋白His-SpiC有良好的免疫反应原性.所建立的以重组蛋白His-SpiC介导的间接ELISA有较好的特异性,能够区分spiC基因缺失型疫苗候选株免疫与野生菌自然感染.结论 重组蛋白His-SpiC呈可溶性表达,具有良好的免疫原性,以重组蛋白His-SpiC建立的间接ELISA,可以作为区分感染和免疫动物(DIVA)鸡白痢疫苗免疫的鉴定方法.
