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鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用
目的 进行鸡白痢沙门菌SpiC蛋白原核表达并建立以SpiC蛋白为检测抗原的间接ELISA.方法 以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增384 bp的spiC基因.将spiC基因克隆至原核表达载体pET30a中,构建重组原核表达质粒pET30a-spiC,再转化到表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定,纯化His-SpiC蛋白,建立SpiC蛋白为检测抗原的间接ELISA并检测临床血清样品.结果 通过对诱导后重组菌裂解产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,重组菌可以表达相对分子质量(Mr)约19 200的可溶性重组蛋白His-SpiC.重组蛋白GST-SpiC免疫无特定病原体鸡,所获得的高免血清能识别重组蛋白His-SpiC,表明体外表达的重组蛋白His-SpiC有良好的免疫反应原性.所建立的以重组蛋白His-SpiC介导的间接ELISA有较好的特异性,能够区分spiC基因缺失型疫苗候选株免疫与野生菌自然感染.结论 重组蛋白His-SpiC呈可溶性表达,具有良好的免疫原性,以重组蛋白His-SpiC建立的间接ELISA,可以作为区分感染和免疫动物(DIVA)鸡白痢疫苗免疫的鉴定方法.
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两株抗幽门螺杆菌特异性卵黄抗体的制备及性能
目的 分别制备抗幽门螺杆菌(H.pylori)全菌(SS1株)和尿素酶I和尿素酶B的重组蛋白(rIB)的特异性卵黄抗体(IgY),纯化后研究其体外抑菌效果.方法 分别以超声破碎SS1菌液和rIB为抗原免疫来杭鸡,用水稀释法和硫酸铵沉淀法纯化获得相应特异性IgY(SS1-IgY、IB-IgY).将特异性IgY与SS1混合作用后共培养检测其抑菌效果,快速脲酶试验检测其抗尿素酶作用.结果 成功制备2种特异性IgY:SS1-IgY和IB-IgY,效价超过1∶12 800,纯度超过80％.SS1-IgY和IB-IgY均有体外抗尿素酶活性和抑菌作用.结论 SS1-IgY和IB-IgY均具有在体外抑制H.pylori尿素酶活性和抑制H.pylori生长的作用.
