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维甲酸核受体文献资料
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维甲酸核受体RARα真核表达载体的构建、突变纠正及表达
目的 构建维甲酸核受体RARα真核表达载体,并检测其在人肺腺癌细胞A549中表达.方法 从小鼠巨噬细胞RAW264.7中提取总RNA,以RT-PCR法扩增RARα cDNA,克隆至真核表达载体pDsRed1-C1中,测序结果显示RARα第1040位A→G,导致其编码蛋白的氨基酸发生改变.通过二次PCR将其纠正,重组载体RedC1-RARα转化大肠埃希菌Top10,筛选阳性克隆做酶切及测序鉴定.脂质体瞬时转染A549细胞,在荧光显微镜下观察RARα的表达.RT-PCR法检测RARα的mRNA水平表达.结果 通过RT-PCR及二次PCR得到RARα cDNA,构建其真核表达载体,脂质体瞬时转染A549细胞得到了成功表达,RARα基因产物定位于细胞核内.结论 成功构建维甲酸核受体RARα真核表达载体,且证实RARα编码蛋白定位于细胞核内,本研究结果为进一步探讨结核分枝杆菌固有免疫机制奠定了基础.
关键词： 维甲酸核受体 细胞内病原体抗性基因1 二次PCR 突变纠正 转染
