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重度肥胖症患者膳食干预前后肠道内硫酸盐还原菌的定量检测
目的 检测重度肥胖症患者膳食干预过程中,肠道内硫酸盐还原菌( SRB)的数量变化,为进一步研究SRB与肥胖的关系提供参考.方法 以SRB基因组中的重要功能基因-腺苷酰硫酸(APS)还原酶基因作为指示基因,通过实时定量PCR的方法检测了12名重度肥胖症患者在进行膳食干预过程中随着体重的降低,肠道内SRB的数量变化,同时以16S rRNA基因对肠道内总菌进行定量来计算SRB占总菌的相对比例.结果 膳食干预过程中,随着患者体重的显著降低,其肠道内SRB占总菌的比例也显著下降.在维持期,患者体重仍和干预前有显著差异,但较干预期有所回升；其体内SRB含量也显著低于干预前,但相比干预期,有所上升.结论 研究结果提示肠道菌群中SRB细菌与肥胖的发展有密切关系,为后续研究SRB细菌的功能和作用机理奠定了基础.
关键词： 硫酸盐还原菌 重度肥胖症 膳食干预 腺苷酰硫酸还原酶基因 定量PCR -
肠道硫酸盐还原菌DGGE分析技术的建立
目的 建立分析肠道内硫酸盐还原菌(Sulfate-reducing bacteria,SRB)组成的变性梯度凝胶电泳(Denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术,并用于分析10例健康人粪便样品中的SRB组成.方法 从GenBank中下载13株脱硫弧菌科细菌的腺苷酰硫酸还原酶α亚基基因(aprA)的序列,利用Clustal X、Simulated PCR (SPCR)软件比较、评估了2对针对aprA 基因的引物(AprA-3-FW/APS-RV和AprA-1-FW/AprA-5-RV)用于扩增粪便样品中的SRB的特异性.确定PCR引物和条件,进一步摸索并建立DGGE分析体系.结果 Clustal X和SPCR软件分析的结果均表明引物AprA-3-FW/APS-RV优于AprA-1-FW/AprA-5-RV.实际PCR的结果也显示AprA-1-FW/AprA-5-RV扩增效率低并有非特异扩增.建立DGGE体系,对10例健康人肠道中SRB的分析显示,每个个体肠道中SRB的种类有l到5种不等.结论 基于aprA序列的DGGE技术是分析肠道SRB组成的有效方法.
关键词： 硫酸盐还原菌 腺苷酰硫酸还原酶基因 DGGE 肠道菌群
