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聚丁二炔纳米粒对大肠埃希氏菌的免疫检测
背景:采用PCR、ELISA、免疫荧光球法,以及基因芯片技术进行肠道病原菌的快速检测,需要数小时才能得到结果,不适用于现场快速检验.目的:制备聚丁二炔纳米粒,对大肠埃希氏菌进行免疫检测.方法:采用超声分散法制备聚丁二炔纳米粒,并利用其检测大肠埃希氏菌.结果与结论:制备的聚丁二炔纳米粒粒径均匀,分布范围窄,结构稳定.取大肠埃希氏菌稀释液滴入聚丁二炔免疫纳米粒稀释液中2 min,溶液颜色由蓝变红,表明聚丁二炔纳米粒的检测速度快;可见吸收光谱图、透射电镜图、激光粒径分布图均显示,加入大肠埃希氏菌后聚丁二炔免疫纳米粒变化很大.在利用聚丁二炔免疫纳米粒比色检测大肠埃希氏菌的过程中,其鼠抗大肠埃希氏菌多克隆抗体起到了功能分子的作用,抗原-抗体结合反应是特异性的.
关键词： 聚丁二炔 纳米粒 10 12二十五碳二炔酸(PCDA) 金黄色葡萄球菌蛋白A 大肠埃希氏菌 -
SpA致病性和基因表达调控的研究进展
SpA是金黄色葡萄球菌的重要毒力因子,在金葡菌抗吞噬、诱导B细胞凋亡、引起葡萄球菌性肺炎、心内膜炎等方面发挥重要作用.SpA的表达由非常精细复杂的系统调控.对SpA致病和基因调控机制的研究有助于发现治疗金葡菌感染的新途径.
关键词： 金黄色葡萄球菌蛋白A 致病性 基因调控 -
SpA 刺激单核巨噬细胞表达早期致炎因子的实验研究
目的：探讨金黄色葡萄球菌蛋白A（SpA）对单核巨噬细胞表达早期致炎因子 TNF‐α、IL‐1和IL‐6的影响。方法用一定浓度SpA与THP‐1细胞培养不同时间，用MTT法测定SpA对THP‐1细胞增殖的影响；用ELISA测定培养液中TNF‐α、IL‐1和IL‐6的水平；用RT‐PCR检测细胞TNF‐α、IL‐1和IL‐6相应mRNA的表达，并对结果进行统计学分析。结果 SpA对THP‐1细胞增殖的影响与其作用剂量有关。SpA可促进巨噬细胞分泌 TNF‐α、IL‐1和IL‐6及表达相应mRNA ，且呈一定剂量‐效应和时间‐效应关系。SpA刺激巨噬细胞分泌TNF‐α、IL‐1、IL‐6和表达相应mRNA均在12 h达高峰。SpA刺激组TNF‐α、IL‐1和IL‐6的表达和释放均显著升高（P＜0．01）。结论 SpA可明显促进单核巨噬细胞表达和分泌早期致炎细胞因子 TNF‐α、IL‐1和IL‐6。SpA在启动金葡菌性脓毒症及促进其发展中，具有不可忽视的作用。
关键词： 金黄色葡萄球菌蛋白A T HP-1 肿瘤坏死因子 白细胞介素-1 白细胞介素-6 -
金黄色葡萄球菌SPA基因的克隆、表达及纯化
目的: 构建携带Staphylococcal protein A (SPA)基因的原核表达载体, 诱导表达具有活性的SPA.方法: 用PCR从金黄色葡萄球菌基因组中扩增SPA基因并克隆入pET32a(+)载体中, 在大肠杆菌BL21〈DE3〉中表达.表达产物经亲和层析进行纯化.结果: 所构建的原核表达载体为高效表达载体, 工程菌表达的SPA约占菌体总蛋白的40%, 经亲和层析纯化后获得SPA, 纯度达到99%.结论: 成功地建立了制备及纯化SPA的方法, 为SPA大量生产以及构建SPA融合表达体系奠定了基础.
关键词： 金黄色葡萄球菌蛋白A 基因 克隆 表达
