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基于雌激素受体研究氯化锂干预成骨细胞的分化及自噬
背景:临床应用锂治疗造血系统疾病和双极性疾病已经有数十年,并且发现锂可以直接刺激骨髓间充质干细胞的增殖.目的:研究雌激素受体抑制下氯化锂对大鼠成骨细胞增殖分化及自噬的影响.方法:实验选取10只出生72 h的SPF级SD乳鼠(由黑龙江中医药大学提供).采用酶消化法和茜素红染色法获得和鉴定成骨细胞.取对数生长期成骨细胞,于培养基中加入不同浓度的氯化锂(0,1,2,5 nmol/L)处理24 h,采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况.另取成骨细胞随机分为空白组(正常培养细胞)、抑制剂组(10-7 mol/L ICI 182780)、治疗组(5 nmol/L氯化锂+10-7 mol/L ICI182780).采用钙化结节染色及碱性磷酸酶活性检测各组成骨细胞分化情况;Western blot法测定各组成骨细胞中Beclin1和Runx2蛋白表达情况.结果与结论:①倒置显微镜下观察细胞多为单核、多边形及梭形,局部有细胞密集的细胞团;②CCK-8法检测结果显示不同浓度的氯化锂都能对成骨细胞增殖产生促进作用,呈浓度依赖性;③茜素红染色结果显示与空白组比较,抑制剂组成骨细胞矿化能力明显降低,与抑制剂组比较,治疗组成骨细胞矿化结节能力明显增加(P＜0.05);活性测定结果显示与空白组比较,抑制剂组中碱性磷酸酶活性明显降低,与抑制剂组比较,治疗组中碱性磷酸酶活性明显增加(P＜0.05);④Westem blot结果显示与空白组比较,抑制剂组中Beclin1和Runx2蛋白表达明显降低,与抑制剂组比较,治疗组中Beclin1和Runx2蛋白表达显著增加(P＜0.05);⑤结果提示,雌激素受体抑制下氯化锂可以提高大鼠成骨细胞增殖分化及自噬.
