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脱细胞猪角膜基质支架的制备及其生物相容性
背景：研究发现多种生物材料可制备角膜基质支架且具有良好的生物相容性，而关于脱细胞猪角膜基质支架的制备和生物相容性研究不多。
目的：制备脱细胞猪角膜基质支架，探讨其与人角膜基质细胞的生物相容性。
方法：制备脱细胞猪角膜基质支架及其浸提液。取生长状态良好的人角膜基质细胞，分别以脱细胞猪角膜基质支架浸提液(实验组)、完全培养基培养(对照组)培养，培养后1，2，3 d，采用MTT法检测人角膜基质细胞的增殖；将人角膜基质细胞直接接种于脱细胞猪角膜基质支架上，接种1，3，7 d，采用免疫化学法测定人角膜基质细胞在支架内的生长情况。
结果与结论：①随着时间的增加，实验组与对照组人角膜基质细胞数量不断增加，两组不同时间点的吸光度值比较差异无显著性意义；②人角膜基质细胞在脱细胞猪角膜基质支架上生长良好，细胞整联蛋白β1、波形蛋白、乙醛脱氢酶3A1呈阳性表达，CD34、CDK2和K-Ras蛋白也呈阳性表达；③结果表明，脱细胞猪角膜基质支架无细胞毒性，与人角膜基质细胞具有良好的生物相容性。 -
Integrin β1在维生素C诱导小鼠诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化中的作用
目的:探讨整联蛋白β1(Integrin β1)在维生素C(Vc)诱导小鼠诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)向心肌样细胞(cardiomyocytes,CMs)分化中的作用.方法:在立式显微镜下,分别摘取胚胎(12.5 d、14.5 d及16.5 d)BALB/c胎鼠、新生(出生1d,P1)和成年BALB/c小鼠的心脏,提取总RNA,半定量及实时定量PCR分析心脏发育不同时期Integrin β1的表达.利用悬滴培养形成拟胚体(embryoid body,EB)的方法体外诱导iPSCs向心肌样细胞分化,诱导过程中分别添加Vc和integrin β1抑制剂(HMβ1-1)处理,共分为3组:对照组、Vc处理组和Vc+ HMβ1-1处理组.诱导分化的第3、5、7天,半定量及实时定量PCR检测Oct4、integrin β1和心肌特异性因子(α-MHC、MLC2a).用免疫荧光染色法检测心肌特异性结构蛋白心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)的表达.结果:Integrin β1在心脏胚胎发育时期(E12.5、E14.5、E16.5、P1)的表达递增(P＜0.01),成年期表达有所回落(P＜0.01).半定量及实时定量PCR的结果提示,Vc组α-MHC、MLC2a的表达显著高于对照组(P＜0.01),加integrin β1抑制剂HM β1-1后表达量降低(P＜0.01).跳动EBs计数的结果提示,诱导分化第10、14、18、22、26天,Vc组跳动EBs的百分率显著高于对照组(P＜0.01)；而Vc+HMβ1-1组跳动EBs的百分率相对于Vc组显著降低(P＜0.01).免疫荧光染色显示,Vc组有较强的cTnI表达,添加integrin β1抑制后,Vc+ HM31-1组cTnI的表达明显减弱.结论:Vc可促进iPSCs向心肌细胞分化,其机制可能是通过integrin β1介导.
