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抑制脑血栓形成的硫磷酸酯脱氧寡核苷酸的亲和性研究
目的为抑制脑血栓形成,合成与TF基因启动子区切应力反应元件(SSRE)形成三链DNA的硫代磷酸酯寡核苷酸(TFO).方法设计TFO序列14条,采用固相亚磷酰胺三酯固相法合成TFO.硫代磷酸酯修饰在TFO的3'末端进行.应用电泳迁移分析(EMSA)观察寡核苷酸和硫代脱氧寡核苷酸的亲和性.结果在设计合成的14条寡核苷酸中,与靶序列能形成三链DNA的TFO只有T21GTa、T14GTa和T15GTa,其Kd值分别为3.6×10-10、1.0×10-9和1.0×10-8(M),经硫代磷酸酯修饰后分别为:2.3×10-9、3.8×10-9和1.5×10-8.结论硫代磷酸酯修饰的T21GTa-ps、T14GTa-ps和T15GTa-ps能够与TF基因启动子SSRE的3个位点形成三链DNA.
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硫代磷酸酯寡核苷酸的合成及其对内皮细胞组织因子(Tissue factor,TF)基因表达及TF促凝活性的作用
为合成与TF基因启动子区切应力反应元件(Shear stress responsive element,SSRE)形成三链DNA的硫代磷酸酯寡核苷酸(Triple helix-forming phosphorothioate oligodeoxynucleotides,TFO-ps),探讨其对内皮细胞TF基因表达及TF促凝活性的影响.我们设计反向TFO(T21GTa)序列,采用固相亚磷酰胺三酯固相法合成TFO.在TFO的3′末端进行硫代磷酸酯修饰.应用电泳迁移分析(Electrophoretic mobility shift assays,EMSA)观察寡核苷酸和硫代脱氧寡核苷酸的亲和性.在ECV304内皮细胞株观察γ-32P标记硫代磷酸酯TFO的细胞摄取及其对TF基因表达的影响.结果显示,TFO-ps(T21Gta-ps)与靶序列能形成三链DNA,其Kd值为3.6×10-10M.在内皮细胞株ECV304细胞, TFO-ps(T21GTa-ps)的细胞吸收率为11.65%,主要分布在核沉淀,约占吸收总量的77.25%,显著降低内皮细胞TF基因mRNA表达及TF蛋白合成的平均光密度(AOD)值,显著降低TF的促凝活性.以上结果表明,TFO-ps(T21GTa-ps)具有较好的抗凝活性,其机制与抑制TF基因表达有关.
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寡核苷酸链在肿瘤反基因疗法中的运用新进展
反基因疗法是通过寡核苷酸链在dsDNA与蛋白质的结合部位形成三链结构来抑制基因的转录,达到治疗肿瘤的效果.由于天然寡核苷酸链存在易被核酸酶消化、半衰期短、稳定性差、不易透过细胞膜、以及安全性等问题,制约了反基因技术的发展.近年来研制出的硫代寡核苷酸链、肽核酸、锁核酸等修饰物使寡核苷酸链的性能得到了很大提高,为反基因疗法的临床广泛应用提供了理论和实践依据.本文就寡核苷酸链在肿瘤及基因疗法中的运用新近展作一综述.
