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慢病毒转染绿色荧光蛋白对乳腺癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群的影响
背景:研究发现通过流式分选的SP肿瘤干细胞具有干细胞功能,提示可用于检测表面标志未知的肿瘤干细胞.目的:观察慢病毒转染绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)对乳腺癌细胞系MCF-7中SP肿瘤干细胞生物学特性及亚群分布的影响.设计、时间及地点:细胞学基因检测水平体外观察,于2007-06/2008-07在南京医科大学第一附属医院普外科实验室完成.材料:MCF-7细胞株由上海细胞生物学研究所馈赠,GFP-MCF-7细胞株由江苏省人民医院普外实验室保存.方法:取MCF-7与GFP-MCF-7细胞株,加入含10%小牛血清的高糖DMEM培养液,在37 ℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度恒温箱中培养,生长至80%～90%融合时消化传代,取处于对数生长期的两种细胞进行实验.主要观察指标:利用流式细胞技术检测转染前后细胞中SP肿瘤干细胞的比例,运用Percoll不连续密度梯度法分离转染前后富集SP肿瘤干细胞的亚群,平板克隆实验测定各亚群的克隆形成率,观察比较转染前后细胞生长曲线、骨桥蛋白的表达水平.结果:MCF-7与GFP-MCF-7细胞中SP肿瘤干细胞比例分别为2.79%和2.73%,转染前后差异无显著性意义(t=2.184,P > 0.05).经Percoll分选,MCF-7与GFP-MCF-7细胞均分为5层,其中GFP-MCF-7第4亚群中明显富集SP肿瘤干细胞,且克隆形成率高(t=3.415,P < 0.01).转染前后细胞生长曲线无明显变化,且骨桥蛋白的表达水平基本相似(t=2.562,P > 0.05).结论:慢病毒转染绿色荧光蛋白对MCF-7中的SP肿瘤干细胞比例、亚群分布、细胞生物学特性无明显影响,且Percoll不连续密度梯度法富集效果显著.GFP-MCF-7细胞株可用于乳腺癌肿瘤干细胞转移动物模型的构建等实验.
