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pGEX-4T-2-RUNX3质粒文献资料
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原核表达载体GST-RUNX3的构建及其在大肠杆菌表达
目的 构建GST/RUNX3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法 利用Kpn1和Xho1位点酶切pcDNA3.1-RUNX3质粒,将获得的1300bp RUNX3编码序列插入到pGEX-4T-2中,构建pGEX-4T-2-RUNX3质粒,并转化Ecoli DH5α,筛选阳性重组子,酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coliBL21中,经IPTG诱导表达后SDS-PAGE电泳鉴定.结果 酶切pGEX-4T-2-RUNX3质粒获得1300bp RUNX3片段,经测序后获得的DNA序列与GenBank进行同源性比对,证实pGEX-4T-2-RUNX3构建成功.在E.coliBL21用IPTG进行诱导表达后,SDS-PAGE电泳方法 证实了GST-RUNX3融合蛋白表达.结论 成功构建了RUNX3原核表达载体,其融合蛋白在大肠埃希菌表达,为进一步纯化RUNX3蛋白和研究RUNX3的生物学功能奠定了基础.
关键词： pGEX-4T-2-RUNX3质粒 原核表达 融合蛋白 大肠埃希菌
