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大豆脱水应答元件结合蛋白(GmDREB1)的非融合原核表达及纯化
目的 大豆脱水应答元件结合蛋白(GmDREB1转录因子)基因是应用于转基因小麦中增强其耐旱、盐碱的基因,本研究拟探索获得与天然蛋白GmDREB1一致的蛋白表达纯化方法,以获得足量的蛋白纯品,为该外源蛋白的安全性评价奠定基础.方法 将GmDREB1基因克隆到原核表达载体pBV220中,构建重组表达载体pBV220-GmDREB1,转化E.coli DH5a进行诱导表达,通过优化GmDREB1基因密码子、改善诱导表达条件及选择合适的表达载体等实现目的蛋白的高效表达,对表达产物进行阳离子交换和分子筛等层析纯化,对获得的纯化蛋白进行序列、活性及免疫原性等测定.结果 含序列优化目的基因的重组载体pBV220-GmDREB1转化E.coliDH5a后,经42℃诱导表达2小时,获得了以可溶性为主的GmDREB1蛋白,经层析纯化获得了与天然目的蛋白一致的蛋白纯品.结论 利用本研究方法可得到在N端序列、活性及免疫原性等方面与天然GmDREB1蛋白一致的目的蛋白.
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转GmDREB1基因抗旱小麦对大鼠肠道菌群的影响
目的 通过动物试验观察转GmDREB1基因抗旱小麦对大鼠肠道菌群的细菌种类、数量的影响.方法 60只SD大鼠按性别、体质量随机分为3组:转基因小麦组(A组)、亲本小麦对照组(B组)和AIN-93对照组(C组),分别饲喂相应饲料12个月.无菌采集大鼠粪便样品,用于五种常见菌群的分离培养计数及变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析.结果 喂养饲料后,A组及B组雄性、雌性大鼠粪便中双歧杆菌、乳杆菌的数量均高于C组,差异有统计学意义(P＜0.05);试验前后,A组及B组大鼠粪便中常见菌群数差异无统计学意义(P＞0.05);A组与B组DGGE图谱的每条泳道的条带数目、多样性指数差异无统计学意义(P＞0.05).聚类分析结果显示,A组及B组样品的组间相似性较高,未出现明显分支.结论 未发现转GmDREB1基因小麦对大鼠肠道菌群有不利影响.
