您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
噬菌体表达文库文献资料
-
鼠源抗烟曲霉单链抗体库制备及鉴定
目的 构建鼠源抗曲霉菌单链抗体(scFv)噬菌体展示文库并进行初步鉴定,为制备用于侵袭性曲霉感染实验室诊断的特异性抗体提供新的方法.方法 利用噬菌体展示技术构建鼠源抗烟曲霉半乳甘露聚糖(GM)ScFv库,经过4轮“吸附-洗脱-扩增”淘选富集,随机挑选克隆进行可变区基因测序确定文库多样性,并用phage-ELISA筛选烟曲霉特异性结合的克隆.结果 构建的scFv噬菌体表达文库,库容量约为1.8×107;经4轮富集筛选,洗脱的表达scFv噬菌体滴度渐增;随机挑选出4轮筛选后的20个克隆,其可变区基因序列不同;随机挑选出4轮筛选后的90个克隆,其中6个克隆与烟曲霉GM特异性结合,而与对照的白假丝酵母菌无结合.结论 构建并初步鉴定了抗曲霉菌单链抗体库,库容量大,VH和VL区具备多样性;筛选的scFv与曲霉菌GM特异性结合,提供了快速制备、筛选GM高特异性抗体分子的新方法.
关键词： 单链抗体(ScFv) 噬菌体表达文库 烟曲霉 半乳甘露聚糖(GM) -
风湿性心脏病心肌组织噬菌体表达文库的构建和分析
目的:构建风湿性心脏病患者心脏组织噬菌体表达文库.方法:外科手术治疗中取风湿性心脏病患者新鲜心耳组织,用QIAGEN试剂盒提取RNA,用逆转录酶合成cDNA第一链,用长距离PCR合成双链cDNA,SfiⅠ酶切cDNA后过柱分级收集,用T4 DNA连接酶重组连接入λTriplEx2载体,后用λ噬菌体包装后构建成原始文库,用PCR、X-gal等方法进行文库质量鉴定.结果:构建了风湿性心脏病心肌组织噬菌体表达文库,原始文库滴度为3.3×106 pfu/mL,重组率为99％,81.25％外源重组片段大于1 kb.结论:成功构建了高质量的风湿性心脏病患者心肌组织噬菌体表达文库,为风湿性心脏病的分子机制寻找新的研究策略奠定了实验基础.
