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TaqMan荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)文献资料
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登革-2型病毒一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法建立
目的 建立一种针对登革2型病毒(DENV-2)的快速、灵敏、特异的检测方法.方法 从GenBank下载105株DENV-2病毒毒株全基因序列,应用生物软件Bioedit进行比对分析筛选出保守序列,在保守区域设计特异引物和探针,建立检测DENV-2的TaqMan荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法.结果 该方法检测灵敏度达到102 copies/μL;特异性验证中除登革2型病毒有明显扩增外,与墨累谷脑炎病毒、西尼罗病毒、蜱传脑炎病毒、登革病毒1、3、4型、黄热病毒和科萨努尔森林病毒、乙型脑炎病毒均无交叉反应.重复性实验结果表明该方法的组间和组内的变异系数(CV)均＜2％.对人工感染DENV-2的87只蚊虫标本进行比对实验,结果荧光定量RT-PCR检测出56份阳性,传统RT-PCR只检测出16份阳性,差异有统计学意义(x2=37.908,P=0.000).结论 TaqMan荧光定量RT-PCR方法检测DENV-2,特异性强、敏感性高.
