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黄曲霉毒素B1抗原模拟表位高效表达
目的 构建黄曲霉毒素B1(AFB1)模拟表位pⅧ噬菌体展示载体,为建立无毒害免疫学检测方法提供依据.方法 构建呈现AFB1抗原模拟表位的噬菌体载体,并引入肠激酶酶切位点,诱导表达,肠激酶处理重组噬菌体颗粒,酶联免疫吸附法鉴定反应原性.结果 重组质粒酶切谱、PCR扩增结果及测序结果均与设计一致,在pC89载体中插入了GACGACGACGACAAGCATCCTAGTGATCCGCGTCATGGG序列,肠激酶处理后的重组噬菌体颗粒可与AFB1抗体特异性结合,吸光度(A)值可达2.112.结论 成功构建了包含肠激酶酶切位点的AFB1抗原模拟表位pⅧ噬菌体表达载体,重组噬菌体颗粒经初步表达有一定反应原性.
关键词： 黄曲霉毒素B1(AFB1) 模拟表位 pC89 肠激酶 -
PC-B2对AFB1致肝细胞DNA损伤及修复影响
目的 探讨原花青素B2(PC-B2)对黄曲霉毒素B1 (AFB1)所致人胚胎肝细胞(L-02)DNA损伤及修复基因表达影响.方法 取对数期生长良好的L-02细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组、PC-B2处理组(3、10、30 μg/mL)、AFB1染毒组(10、20、30、40 μg/mL)和PC-B2干预组(3、10、30 μg/mL PC-B2+ 30 μg/mL AFB1),利用噻唑蓝法、酶联免疫吸附法和荧光定量PCR技术分别测定细胞增殖活力、细胞上清液8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量及细胞hOGG1基因表达水平.结果 AFB1可明显抑制L-02细胞增殖活力(P＜0.05),呈剂量-效应关系;与溶剂对照组比较,30 μg/mL AFB1组细胞活力[(69.9±2.46)％]明显降低(P＜0.05),细胞上清中8-OHdG含量[(2.779±0.089) ng/mL]明显升高(P＜0.05);与30 μg/mL AFB1组比较,3、10、30μg/mL PC-B2干预组细胞活力[分别为(70.6±2.67)％、(69.7±1.94)％、(82.4±1.58)％]明显升高(P＜0.05),细胞上清中8-OHdG含量[分别为(2.550 ±0.078)、(2.376 ±0.109)、(1.873±0.065) ng/mL]明显降低(P＜0.05);与溶剂对照组比较,30 μg/mLAFB1组L-02细胞hOGG1基因表达减少(P＜0.05);与30 μg/mL AFB1组比较,PC-B2干预组L-02细胞hOGG1表达明显升高.结论 PC-B2可提高肝细胞增殖活力,抑制AFB1所致肝细胞DNA损伤,其机制可能与调控修复基因hOGG1表达有关.
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黄曲霉毒素B1检测
目的：探讨联合酶联免疫吸附法和薄层色谱法检测黄曲霉素B1（AFB1）的特点和可行性。方法：先用薄层色谱法初步筛选，酶联免疫法定量确认，后用薄层色谱法终确证AFB1含量。结果：AFB1含量在1.0~20.00ug/kg范围内，标准曲线r值为0.993~0.999，变异系数为0.4%~2.6%，回收率为92.0%~105.0%；酶联免疫吸附法测定结果在10.0~45.0ug/kg时，应用薄层色谱法确证试验，符合率达100%。结论：酶联免疫法与薄层色谱法相结合可以快速、可靠、准确地测定AFB1。
关键词： 黄曲霉毒素B1(AFB1) 检测方法 酶联免疫吸附法 薄层色谱法
