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HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒的构建及鉴定与表达
目的:应用重叠区扩增基因拼接法(gene SOEing)获得HBV X-HCV C融合基因,构建HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒.方法:应用gene SOEing法扩增HBV X-HCV C融合基因并将其克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,获得重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-XC,经PmeⅠ酶切线性化后电转化BJ/AdEasy菌,构建重组腺病毒质粒pAd-XC;鉴定正确的pAd-XC经Pac Ⅰ酶切线性化后脂质体法转染293细胞进行包装,扩增,利用绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)监测病毒滴度和感染效率,Western-blot法检测目的蛋白的表达.结果:测序结果显示,pAdTrack-CMV-XC构建成功;PCR及PacⅠ酶切鉴定结果表明pAd-XC构建成功;经Pac Ⅰ酶切线性化的pAd-XC转染293细胞后24 h即可观察到GFP的表达;回收的病毒可重复感染293细胞,Western-blot法检测到目的蛋白的表达,证实有感染能力且可表达目的蛋白的病毒颗粒包装成功.结论:HBV X-HCV C融合基因重组腺病毒构建成功,为进一步研究HBV X蛋白和HCV C蛋白的生物学功能奠定了基础.
关键词： HBVX基因 HCVC基因 融合基因 重叠区扩增基因拼接法 腺病毒 -
乙肝x基因在原发性肝癌中表达的临床研究
目的通过对HBxAg在HBsAg阳性的原发性肝癌中的表达研究,进一步了解HBVx基因在原发性肝癌发生发展与转归中的作用.方法对HBxAg在原发性肝癌及其转移灶组织中的表达进行免疫组化检查,同时采用聚合酶链反应法(PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测病人血中的HBVDNA、HBeAg,了解HBxAg在原发性肝癌组织中表达与肝癌分期及AFP表达的关系;并将结果进行统计分析.结果 HBxAg在肝癌单发灶组(Ⅰ组)病人阴、阳性表达分别为8/28、20/28例;在肝癌伴肝内转移灶组(Ⅱ组)病人阴、阳性表达分别为6/32、26/32例;肝癌病人外周血中的HBVDNA在Ⅰ组和Ⅱ组阳性数分别为5/28、7/32例,HBeAg在Ⅰ组和Ⅱ组阳性数分别为7/28、10/32例;HBxAg的阳性表达数,在临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期病人中分别为1/5、19/22、26/32,在大小肿瘤中阳性表达数分别为42/48、4/12,在AFP阴阳性表达组中阳性表达数分别为13/16、33/44.结论乙肝x基因与原发性肝癌及转移灶中癌的发生发展有一定的关系,与病人预后判断也有一定的关系,但其表达的高低不能作为肝癌转移倾向的预测指标.它对原发性肝癌发生发展的作用不受乙肝复制指标的影响.
