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原代大鼠文献资料
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原代大鼠胰岛的分离纯化及功能鉴定
目的 探讨成年大鼠胰岛分离、纯化的方法,为成人胰岛的分离纯化奠定基础.方法通过用胶原酶P消化胰腺及利用Histopaque 1077分离液离心分离纯化雄性SD大鼠胰岛,用双硫棕(DTZ)染色,吖啶橙-碘化丙啶(AO/PI)染色和胰岛素分泌实验来鉴定胰岛的纯度、活性和功能;利用激光共聚焦技术检测胰岛细胞中钙离子浓度.结果 分离获得的胰岛可被DTZ和AO/PI分别染成猩红色和绿色;体外刺激胰岛素分泌实验,2.8 mM、8.3 mM、16.7mM葡萄糖情况下胰岛素分泌量分别是:(11.7 ± 1.4)uIU/mL、(38.2 ± 8.7)uIU/mL、(86.3 ± 5.1)uIU/mL;在2.8 mM葡萄糖基础上,8.3 mM葡萄糖明显增加胰岛细胞中钙离子浓度,16.7 mM葡萄糖在8.3 mM葡萄糖基础上又进一步升高钙离子浓度.结论采用胶原酶P消化法及Histopaque 1077分离液离心分得的胰岛纯度高,活性、功能良好,随着葡萄糖浓度的增加,胰岛细胞中钙离子浓度明显增加.
