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五味子乙素通过NOS/NO系统预防BaP所致HTR8-SVneo细胞氧化损伤
目的 研究五味子乙素(Sch B)预防环境污染物苯并(a)芘(BaP)致人绒毛膜滋养层细胞HTR8-SVneo氧化损伤的机制. 方法 以HTR8-SVneo细胞为载体,构建BaP氧化应激模型.实验分为3组,BaP组、Sch B组和空白对照组.MTS法检测细胞存活率,还原酶法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)及总一氧化氮合酶(TNOS)含量,用RT-PCR法检测细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA水平. 结果 BaP组细胞存活率(72.2±0.9)％较对照组显著下降(P＜0.05);而0.1、0.5或2 μmol/L Sch B+20 μmol/L BaP各组的细胞存活率分别为(78.2±1.5)％、(86.5±0.6)％、(93.4±1.0)％,显著高于BaP组(P＜0.05).BaP组细胞培养液中NO、TNOS含量、iNOS、eNOS mRNA表达量和eNOS蛋白表达量均显著高于对照组(P＜0.05);而与BaP组相比,Sch B组中NO、TNOS含量,iNOS、eNOS mRNA表达量和eNOS蛋白表达量均随着Sch B剂量的增加逐渐下降(P＜0.05). 结论 Sch B可有效预防BaP所致的HTR8-SVneo细胞氧化损伤,其机制可能与NO)S/NO系统的平衡有关.
关键词： 苯并(a)芘 五味子乙素 人绒毛膜外滋养层细胞 一氧化氮合酶/一氧化氮 -
基于iTRAQ联合2D LC-MS/MS分析PM2.5对人类胎盘滋养细胞的影响
目的:利用蛋白组学方法初步筛选PM2.5通过影响人类胎盘滋养细胞造成不良妊娠率增加可能涉及的蛋白分子和生物进程.方法:用0、30、60、120和200 μg/mL的PM2.5分别染毒HTR-8/SVneo细胞24 h与48 h后观察细胞增殖情况,终确定以120 μg/mL PM2.5染毒细胞24h和48 h进行后续实验.提取胞内蛋白,酶解消化后,同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)标记联合二维液相色谱串联质谱(2DLC-MS/MS)技术分析肽段,鉴定HTR-8/SVneo细胞内的差异表达蛋白,并进行生物信息学分析.结果:120 μg/mLPM2.5染毒24h和48 h后的存活率分别为86.09％和52.36％,与对照组(0μg/mL PM2.5染毒组)相比,细胞存活率显著下降(P＜0.05).120 μg/mL PM2.5 24 h染毒组和48 h染毒组细胞中分别鉴定出182个和486个差异蛋白,涉及细胞生物进程22条和217条.结论:PM2.5对HTR-8/SVneo细胞的影响涉及大量细胞生物进程的改变;iTRAQ联合2DLC-MS/MS技术是一种对染毒后细胞内差异表达蛋白高敏感度、高通量筛选的有效途径,为今后对PM2.5增加不良妊娠结局风险的深入机制研究奠定基础.
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五味子乙素对BaP致HTR8-SVneo细胞损伤的保护作用及机制
目的:研究五味子乙素(Schisandrin B,Sch B)预防苯并芘(BaP)致人绒毛膜外滋养层细胞(HTR8-SVneo)损伤的作用机制.方法:通过新型四唑化合物(MTS)法观察和测定,终选取0.5,1,2μmol/L Sch B分别作用HTR8-SVneo细胞24 h后再给予20μmol/L Bap染毒处理24 h,MTS检测各组细胞生长情况;JC-1荧光染色法观察各组线粒体膜电位荧光强度变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞内促凋亡蛋白(Bax)、细胞色素C (cytochromec,cyt-c)蛋白浓度;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组的凋亡蛋白(Caspase-9).结果:①BaP染毒组OD值为1.187±0.015,0.5,1,2μmol/L Sch B预保护24 h后的OD值分别为1.483±0.022、1.489±0.048和1.531±0.240,差异有统计学意义(P<0.05).②BaP染毒组线粒体荧光强度弱,0.5,1,2μmol/L Sch B预保护24 h后的荧光强度较强,差异有统计学意义(P<0.05).③BaP染毒组Bax、cyt-c蛋白浓度升高,0.5,1,2μmol/L Sch B预保护24 h后细胞内Bax、cyt-c蛋白浓度降低,差异有统计学意义(P<0.05).④BaP染毒组细胞内caspase-9蛋白表达升高,0.5,1,2μmol/L Sch B预保护24 h后细胞内caspase-9蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:Sch B可以预防BaP致HTR8-SVneo细胞损伤,其作用机制可能与抗线粒体途径有关.
关键词： 五味子乙素 苯并芘 人绒毛膜外滋养层细胞 线粒体 细胞色素C
