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猪附红细胞体与巴氏杆菌混合感染的诊治
一、发病情况2002年8月,某养猪户饲养的一批红头30Kg左右的猪群出现陆续发病.病猪表现为体温升高(39.5℃～41.5℃),少食或不食,初期皮肤变红,呼吸加快,少数病猪鼻流清涕,部分猪腹泻,用青、链霉素及氨基比林治疗,病情未见好转,高温持续不退,病程延长,病猪体表及眼结膜色泽变淡、稍黄,有些猪的耳面部呈蓝紫色,随后有坏死现象,后胸腹下、四肢都出现紫红色细小的斑块,3～10天出现死亡.发病率为37%,死亡率为8%.
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猪附红细胞体与巴氏杆菌混合感染的诊治
一、发病情况2002年8月,某养猪户饲养的一批红头30Kg左右的猪群出现陆续发病.
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猪附红细胞体ORF2蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位的预测
目的 预测猪附红细胞体[亦称猪嗜血支原体(Mycoplasma suis,M.suis)]ORF2基因编码蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位.方法 应用生物信息学软件DNAstar的Editseq将M.suis中ORF2的基因核苷酸序列翻译成氨基酸序列,与GenBank中登录的氨基酸序列进行比对,通过Protean模块预测ORF2蛋白的二级结构及其亲水性区域、柔韧性区域、抗原指数、表面可及性等特性,并预测B细胞优势抗原表位.结果 ORF2蛋白具有规则的二级结构,多处于亲水性区域、柔韧性区域、表面可及性较大和抗原指数较高的区段,潜在的优势B细胞抗原表位为17～23、121 ～ 127、138 ～ 144、192 ～ 200氨基酸区段.结论 预测了ORF2蛋白二级结构和B细胞抗原表位,为M.suis 表位疫苗的设计以及血清诊断试剂盒的研发奠定了理论基础.
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猪附红细胞体感染小鼠模型的实验研究
目的 通过建立猪附红细胞体感染的小鼠模型,对附红细胞体在小鼠模型中的感染进行病理变化的检测,以探索该病在啮齿类动物体内的发生、发展及转归的规律,揭示附红细胞体的致病机理.方法 用感染了附红细胞体的猪血液感染昆明小鼠,定期进行感染率和病理组织学检测.结果 建立了附红细胞体感染的小鼠模型,通过对感染小鼠模型的检测,发现在感染的不同阶段各组织器官均发生了不同的病理变化.结论 成功建立了附红细胞体感染小鼠模型,通过对感染小鼠的感染率和病理组织学的观察和检测,进一步揭示了附红细胞体的致病机理.
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猪附红细胞体 ORF5蛋白的空间结构与B 细胞抗原表位预测
目的：预测猪附红细胞体（Mycoplasma suis ，M ．suis）ORF5基因编码蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位。方法联合应用生物信息学软件DNAstar与在线分析软件IEDB的B Cell Epitope Prediction Tools 预测 M ．suis ORF5蛋白的二级结构及其亲水性区域、柔韧性区域、抗原指数、表面可及性等结构特征，经综合分析后预测其B细胞优势抗原表位。结果经分析可见，M ．suis ORF5蛋白具有较为规则的二级结构，潜在的优势B细胞抗原表位为GGVDGGRD、GMRLPEDSR、EGHPDLESAR氨基酸区段。结论预测出 M ．suis ORF5蛋白二级结构和B细胞抗原表位，为 M ．suis免疫原性研究提供新手段，为病原微生物免疫原性研究提供新思路。
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猪附红细胞体ORF4基因片段的人工合成及基因表达
目的 本研究通过人工合成猪附红细胞体ORF4基因,使其在大肠杆菌中高效表达.方法 选择GenBank注册的AJ504999序列的ORF4基因,应用Graphical Codon Usage Analyser选择大肠杆菌偏爱的密码子,改变基因的transl_table,设计并合成3对寡核苷酸链,用PCR-based accurate synthesis(PAS)法进行人工合成.经测序正确后,连接到表达载体PET28a,获得重组表达质粒PET28a/ORF4,导入大肠杆菌BL21(DE3),在30℃,IPTG终浓度1mmol/L的条件下诱导表达,经SDS-PAGE分析,在11 kDa附近出现目的片段.结果 结果表明ORF4基因在大肠杆菌中能够得到高效的表达,通过生物信息学软件分析表明,该蛋白存在19个配基结合位点;在21～22位氨基酸可能存在信号肽裂解位点;为胞内蛋白,没有糖基化位点.结论 ORF4基因能够在大肠杆菌中表达,推测其在M.suis蛋白质的形成,M.suis的生物功能方面有着重要的作用.
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猪附红细胞体半巢式PCR诊断方法的建立
目的 为能够更加准确、敏感的检测出猪附红细胞体(Mycoplasma suis,M.suis),本试验建立一种新的诊断方法-半巢式聚合酶链反应( hemi-nested Polymerase Chain Reaction ,hemi-nested PCR).方法 利用Oligo 6.0和Primer 5.0软件设计筛选出合适的PCR引物,经酶切分析和半巢式PCR进一步鉴定后进行序列测定.同时与普通PCR诊断方法进行比较.结果 测得的猪附红细胞体基因序列与GenBank中发表的猪附红细胞体基因序列(AJ504999)同源性为100%.特异性试验结果表明本实验设计的PCR引物不能从弓形虫、链球菌、大肠杆菌、猪肺炎支原体和猪伪狂犬病病毒的基因组DNA中扩增出条带.通过敏感性试验,半巢式PCR诊断方法低能够检测出0.12fg的标准模板DNA.通过与普通PCR比较,证明本试验建立的半巢式PCR更具敏感性和实用性.结论 本试验建立的半巢式PCR诊断方法具有特异、敏感、实用等特点,为猪附红细胞体的检测提供了一种可靠的诊断方法.
