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蛋白激酶CK2α与食管癌发生发展及临床病理因素的相关性研究
目的 探讨蛋白激酶CK2α在食管癌发生发展中的作用及其与食管癌的临床分期、病理类型之间的关系.方法 采用免疫组织化学法检测该院收治的120例食管癌患者癌组织及癌旁组织中蛋白激酶CK2α蛋白的表达水平,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot技术对其中的19例患者的术后标本的蛋白和mRNA进行检测.比较癌组织和癌旁组织中的蛋白激酶CK2α蛋白和mRNA表达差异.结果 食管癌组织中的CK2α中阳性与强阳性表达率分别高于癌旁组织(P＜0.05).CK2α阳性表达情况在不同T分期、淋巴结转移间差异无统计学意义(P＞0.05),CK2α阳性表达分布在不同临床TNM分期间差异有统计学意义(P＞0.05).CK2α蛋白、CK2αmRNA在食管癌组织的表达均显著的高于癌旁组织(P＜0.05).结论 蛋白激酶CK2α与食管癌的发展有着一定的关系,可以作为临床上对食管癌病变程度的一种分子判定标准.
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RNAi介导CK2α基因沉默对HEp-2细胞侵袭转移的影响机制研究
目的 探讨稳定转染蛋白激酶CK2α的干扰质粒后,对喉癌HEp-2细胞侵袭转移能力影响的机制.方法 体外构建pGCsi-H1-CK2α的干扰质粒稳定转染HEp-2细胞,分为三组.确定获得稳定转染细胞系.Transwell小室检测细胞的侵袭和迁移能力.Western blot检测MMP-2,MMP-9以及E-cadherin的表达.结果 干扰质粒转染组中CK2α基因在mRNA和蛋白水平的表达明显低于未转染组及对照质粒转染组.稳定敲除CK2α阻止了HEp-2细胞的迁移与侵袭.与未转染组及对照质粒转染组相比,干扰质粒转染组中的MMP-2和MMP-9的表达下降,E-cadherin的表达增加.结论 RNAi介导的CK2α沉默可能通过下调MMP-2和MMP-9的表达以及抑制EMT过程来减低喉癌细胞的迁移和侵袭.
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蛋白激酶CK2α在大鼠肝纤维化病理过程中的表达变化
目的：观察蛋白激酶casein kinaseⅡα（CK2α）在大鼠肝纤维化病理过程中的表达变化，以及10-甲氨基-8-硫代苦参碱（M ASM ）抗肝纤维化治疗对CK2α表达的影响。方法采用二甲基亚硝胺（DM N ）和胆管结扎术（BDL ）的方法建立大鼠肝纤维化模型，造模后灌胃给予M ASM （50 mg／kg ）和生理盐水进行治疗。肝组织切片分别采用苏木精-伊红染色进行病理分析，用天狼星红和M asson胶原染色判定肝纤维化程度，免疫组织化学法观察纤维化肝组织中CK2α和α-平滑肌肌动蛋白（α-SM A ）的表达变化。结果与对照组相比，DM N及BDL诱导的肝纤维化组织中CK2α的表达水平均显著上调；注射DM N造模1～4周，随着造模时间的延长，α-SM A表达逐渐增加，CK2α的表达水平相应显著上调；与模型组相比，M ASM 药物治疗组大鼠肝纤维化程度明显缓解，同时CK2α的表达水平显著下调。结论蛋白激酶CK2α的表达水平与肝纤维化的形成呈正相关关系；苦参碱衍生物M ASM抗肝纤维化作用伴随下调CK2α的表达水平，提示CK2α是一个肝纤维化治疗的潜在靶点。
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深低温停循环大鼠海马组织中蛋白激酶CK2α表达情况及其在脑保护中的作用
目的 探讨深低温停循环大鼠海马组织中蛋白激酶CK2α表达情况及其在脑保护中的作用.方法 39只SD大鼠随机分为常温不停循环组、常温停循环组和深低温停循环组,常温不停循环组大鼠在37℃下体外循环20 min;常温停循环组大鼠在37℃下体外循环10 min,停循环10 min;深低温停循环组大鼠在＜20℃下体外循环10 min,停循环10 min.动物模型建立后,取3组大鼠海马组织行组织病理学检查,采用免疫组织化学法和免疫荧光法检测海马组织蛋白激酶CK2α表达情况.结果 3组大鼠均建模成功;常温不停循环组和深低温停循环组大鼠神经细胞和椎体细胞形态和数量均正常,未见缺血性改变,常温停循环组大鼠少量神经元肿胀、变性,少量胶质细胞增生和少量炎性细胞浸润,呈轻度缺血性改变;常温不停循环组大鼠海马组织有极少量蛋白激酶CK2α表达,常温停循环组大鼠海马组织有大量蛋白激酶CK2α表达,深低温停循环组大鼠海马组织有少量蛋白激酶CK2α表达;常温停循环组大鼠海马组织蛋白激酶CK2α灰度值(99.54±3.28)低于常温不停循环组(189.43±8.86)和深低温停循环组(133.65±8.02)(P＜0.05),深低温停循环组低于常温不停循环组(P＜0.05).结论 停循环可引起海马组织中蛋白激酶CK2α含量升高,深低温能降低停循环状态下海马组织中蛋白激酶CK2α含量,发挥一定脑保护作用.
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蛋白激酶CK2α在喉鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义
目的:探讨蛋白激酶CK2α(PK-CK2α)在喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学SP法检测50例LSCC组织(喉癌组)及10例正常舌腭弓黏膜组织(对照组)中PK-CK2α蛋白的表达情况,并采用图像分析系统对表达结果进行定量分析.结果:PK-CK2α蛋白在喉癌组中阳性表达率为64%(32/50),在对照组中阳性表达率为30%(3/10),2组比较差异有统计学意义(P《0.05).喉癌组和对照组之间PK-CK2α阳性表达的平均吸收度(A值)差异有统计学意义(P《0.05), 喉癌组PK-CK2α阳性表达的A值与年龄、性别、临床分型(肿瘤部位)、临床TNM分期和淋巴结转移比较差异均无统计学意义,与病理分级(G1→G2加G3)有显著相关性(P《0.05).结论:PK-CK2α过表达可能与LSCC的发生和发展有关,检测PK-CK2α可作为判定LSCC恶性程度的潜在指标之一,抗PK-CK2α可能为肿瘤治疗提供一种新途径.
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蛋白激酶CK2α亚基cDNA的克隆与序列分析
目的构建人蛋白激酶CK2α重组质粒,研究CK2结构和功能.方法采用RT-PCR、定向克隆和DNA测序方法进行实验.结果通过BT-PCR从Hep-3B肝癌细胞中获得人蛋白激酶CK2α(Protein Kinase 2α)亚基编码区1136bp的cDNA片段,将扩增基因通过粘端连接克隆到pUCm-T载体中,用PCR和限制性内切酶分析鉴定,表明获得重组质粒pUCm-T-CK2α.通过对CK2α编码区cDNA序列测序证实其与GeneBank中登记号为NM-01895的序列一致.结论成功构建了重组质粒pUCm-T-CK2α,为利用CK2αcDNA作为探针进行深入研究奠定了基础.
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RNAi介导的CK2α基因沉默对喉癌细胞上皮间质转化过程的影响
目的 探讨人喉癌Hep-2细胞稳定转染干扰质粒后,蛋白激酶CK2α表达对其上皮间质转化过程的影响.方法 应用体外构建的干扰质粒pGCsi-H1-CK2α稳定转染人喉癌上皮细胞Hep-2,分为未转染组(parental)、对照质粒转染组(pGCsi-H1-control)和干扰质粒转染组(pGCsi-H1-CK2α).转染24 h后经G418筛选出稳定转染的细胞系,应用Real-time PCR和Western blot进行鉴定;采用Transwell小室检测转染后Hep-2细胞的侵袭和迁移能力;使用相差显微镜观察各组细胞形态并通过Western blot检测细胞上皮标志物E-cadherin、vimentin及转录因子slug、snail的表达.结果 干扰质粒转染组中CK2α基因在mRNA和蛋白水平的表达明显低于未转染组及对照质粒转染组(P<0.01).Transwell实验显示稳定敲低CK2α阻止了Hep-2细胞的迁移与侵袭.与未转染组及对照质粒转染组相比,干扰质粒转染组中的E-cadherin的表达增加,但是snail、slug和vimentin的表达下降.结论 RNAi介导的CK2α抑制表达抑制了喉癌细胞上皮间质转化过程.
