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精子特异性阳离子通道2文献资料
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人精子RNA的提取及含量分析
目的 建立可靠的提取人精子RNA的方法,分析其含量并用于检测基因mRNA. 方法 9例正常精液标本液化后,经Percoll纯化,用体细胞裂解液(含0.1% 十二烷基硫酸钠和0.5% Triton X-100的水溶液)于0℃处理15 min去除精子以外的细胞.用RNeasy Kit提取精子RNA,微量核酸测定仪测定RNA量.RNA用于逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),检测β-Actin、精子特异性阳离子通道2(CatSper2)、鱼精蛋白2(Protamine-2)mRNA,同时,检测c-Kit、CD4、上皮细胞钙粘蛋白(E-Cadherin)mRNA,分别排除生精细胞、白细胞和上皮细胞的污染. 结果 体细胞裂解液于0℃处理15 min能去除精子以外的细胞,使精子RNA提取量提高(2.2～4.9倍).9例正常精液标本RNA量为(233.5±75.3)ng/106精子.所有标本RNA用RT-PCR,均成功扩增β-Actin、CatSper2、Protamine-2,但扩增c-Kit、CD4、E-Cadherin未见目的条带. 结论 人精子中含微量RNA,本提取方法能提取人精子中微量RNA,且避免其他细胞污染,可供人精子RNA研究和临床检测选用.
关键词： 精子 RNA 精子特异性阳离子通道2 鱼精蛋白2
