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兔初级卵母细胞生发泡移植方法的研究
目的：以家兔为实验动物模型，探索卵母细胞生发泡(GV)互换的可行性。方法：在注射第一针卵泡刺激素(FSH)72 h后，取大耳白兔卵巢内GV期卵母细胞，用显微操作和电融合的方法，对兔初级卵母细胞进行异卵间GV互换，将重构卵培养于TCM-199加10%FCS中，对重构卵进行成熟培养，后对成熟重构卵进行卵胞浆内精子注射(ICSI)和胚胎培养。结果：对987枚GV期卵母细胞进行了异卵间GV互换，成功互换272枚(27.6%)，电融合后存活230枚(84.6%)，在进行成熟培养后，230枚卵有178枚(77.4%)发育到MII期(排出第一极体)，将成熟卵进行ICSI后，有126枚(70.8%)受精。结论：对兔初级卵母细胞进行GV互换是可行的，若将此法应用于提高高龄妇女卵母细胞的质量，将有助于解决她们的不育问题。
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小鼠单个GV期卵母细胞中ATP8基因的表达分析
目的:探讨小鼠GV期卵母细胞线粒体中ATP8(ATP合酶亚基8)基因的表达情况.方法:应用挤压法从卵巢中分离获得生发泡期(germinal vesicle,GV)卵母细胞;用RT-PCR检测GV期单个卵母细胞中ATP8基因的表达:其中cDNA的合成分两种方法进行:一是将GV期单个卵母细胞直接进行RT合成cDNA,二是先用DNA酶加EcoR Ⅰ酶祛除mtDNA和核DNA后再进行RT;回收产物构建克隆质粒并测序.结果:1.5%琼脂糖电泳显示、测序结果均表明ATP8基因在GV期卵母细胞中有表达.结论:小鼠GV期卵母细胞特异表达的ATP8基因可能与卵母细胞的正常发育成熟相关.
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人类未成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究
目的:探讨玻璃化冷冻未成熟卵母细胞的有效性.方法:根据有无颗粒细胞将实施玻璃化冷冻的GV期卵母细胞分为含颗粒细胞(非裸卵)组和不含颗粒细胞(裸卵)组;将部分GV期卵母细胞体外培养至M Ⅱ期卵母细胞实施玻璃化冷冻,比较非冷冻IVM组与M Ⅱ卵玻璃化冷冻组间、裸卵组与非裸卵组间的存活率、成熟率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果:非裸卵组的成熟率大于裸卵组(P＜0.05),而存活率、受精率、2-细胞形成率、＞2-细胞形成率之间均无统计学差异(P＞0.05).另外,非冷冻IVM组与GV玻化组间成熟率、受精率、卵裂率均存在显著性差异(P＜0.05):非冷冻IVM组与M Ⅱ期卵玻化组间成熟率、受精率、卵裂率间均存在统计学差异(P＜0.05);GV玻化组与M Ⅱ玻化组间存活率、成熟率、受精率、卵裂率间均无统计学差异(P＞0.05).结论:玻璃化冷冻未成熟卵母细胞需要保留颗粒细胞,同时初步构建了人GV期卵的玻璃化冷冻联合IVM技术的雏形.
