首页 > 文献资料
-
组蛋白H3K4甲基转移酶KMT2D研究进展
组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2D(KMT2D),属于哺乳动物H3K4甲基转移酶家族成员,在成人组织中广泛表达,对于早期胚胎发育有重要作用.C-末端的SET区域负责组蛋白H3K4甲基化,维持KMT2D蛋白的稳定性.KMT2D与WRAD、NCOA6、PTIP、PA1和H3K27去甲基化酶UTX组成复合物,在其中起到支架蛋白的作用,维持UTX的稳定性.KMT2D主要催化哺乳动物H3K4单甲基化,与转录因子共同作用于增强子区域,从而调控基因表达.KMT2D在调节细胞发育、分化、新陈代谢和肿瘤抑制方面具有重要作用,其突变导致多种疾病发生.进一步研究KMT2D有助于揭示其异常所引发多种疾病的病因,并且对开发临床药物提供有力的帮助.
-
白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p的原核细胞表达及鉴定
目的 原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性.方法 用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对.选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,PCR扩增Set1-208p的编码基因,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白质表达.用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊侵袭性白念珠菌感染(IC)患者血清进行抗原性鉴定.结果 成功克隆了白念珠菌抗原特异性H3K4甲基转移酶片段Set1-208p基因并诱导表达,获得了纯化的重组肽段,所得蛋白质分子量(Mr)约为29000,带有His标签,经western blot鉴定,诱导的重组蛋白可与IC患者血清特异性反应.结论 成功诱导表达了具有良好抗原反应性的Set1-208p重组蛋白质,为建立相应的抗原、抗体ELISA检测方法提供基础.
-
亚慢性铝暴露对大鼠学习记忆能力及组蛋白H3K4甲基转移酶影响研究
目的 研究铝亚慢性染毒对大鼠学习记忆能力及组蛋白H3第4位赖氨酸( H3K4)甲基转移酶( MLL)的影响. 方法 无特定病原体级健康雄性SD大鼠40只按体质量随机分为对照组和低、中、高剂量组,每组10只. 采用饮水染毒法,对照组给予灭菌自来水,低、中、高剂量组分别每日给予剂量为2、12、72 mg/kg体质量的铝染毒,连续染毒90 d. 染毒结束后,采用Morris水迷宫实验测定大鼠学习记忆能力,采用组蛋白甲基转移酶活性/抑制性试剂盒测定海马组织中MLL活力,采用实时荧光定量聚合酶链反应法测定海马组织中MLL相对表达量. 结果Morris水迷宫实验结果显示:定位航行实验中,大鼠逃避潜伏期在染铝处理与训练时间的交互作用上无统计学意义(P>0.05),大鼠逃避潜伏期在染铝处理的主效应上无统计学意义(P>0.05),但在训练时间的主效应上有统计学意义(P<0.05);空间探索实验中,中和高剂量组大鼠穿越平台位置次数均少于对照组(P<0.05),高剂量组目标象限停留时间短于对照组(P<0.05). 中和高剂量组大鼠海马组织中MLL活力均低于对照组(P<0.01),高剂量组MLL活力分别低于低和中剂量组( P<0.05 ). 各组大鼠海马组织中MLL相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 亚慢性铝暴露可导致大鼠学习记忆能力下降及海马组织中MLL活力降低,提示铝可能通过降低MLL进而影响学习记忆能力.
-
白色念珠菌H3K4甲基转移酶N端肽段抗体的ELISA检测方法建立
目的 建立检测人血清中抗白色念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段(N-terminal region of histone 3 lysine 4 methyltransferase,Set1-208p)IgG 类抗体的ELISA方法,评估其在侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)患者中的早期诊断价值.方法 收集IC患者(105例)、定植患者(37例)、细菌感染患者(25例)、其他真菌感染患者(10例)以及健康体检者(200例)血清,用Set1-208p作为包被抗原,血清1∶500稀释,以羊抗人IgG-HRP为二抗,测定人血清中相应的抗Set1-208p抗体水平,确定cut-off值并考查方法的敏感度、特异度和准确度.结果 以重组Set1-208p抗原建立的ELISA 法精密度良好,批内变异系数 (coefficient of variation,CV)为5.5%,批间CV为10.4%.重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为91.8%,根据ROC曲线,选择吸光度(absorbance,A)值0.40作为cut off值,对IC的诊断敏感度为79.2%,特异度为90%,且与细菌感染及其他真菌感染病人(如曲霉)无非特异交叉反应.此外,IC患者中抗Set1-208p抗体阳性率(76.1%,80/105)显著高于念珠菌定植者抗Set1-208p抗体阳性率(32.4%,12/37)(χ2=22.9,P<0.01).结论 建立了检测抗白念珠菌抗Set1-208p抗体的ELISA法,在IC早期诊断中具有潜在应用价值.
