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内皮细胞靶向的可溶性Notch配体hD1R蛋白对急性髓系白血病细胞增殖的影响
目的 探讨内皮细胞靶向的可溶性Notch配体hD1R蛋白对急性髓系白血病(AML)细胞增殖的影响.方法 以24例初诊AML患者为研究对象(AML组),以9例白细胞或血小板计数略低,但骨髓象未见异常者为对照(对照组),采用实时定量PCR法检测其骨髓CD34+细胞Notch1、Notch2、Notch3、Notch4、Hes1 mRNA水平;诱导、表达及纯化内皮细胞靶向的可溶性hD1R融合蛋白.以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为支持细胞,联合应用重组人干细胞因子(SCF)、TPO、Flt-3配体(FL)、IL-6、IL-3五种人源性生长因子(5GF)及hD1R蛋白为共培养条件,分别将AML组和对照组的CD34+细胞进行体外培养,分析在hD1R组、PBS组(PBS代替hD1R)、5GF组、γ-分泌酶抑制剂(GSI)组(hD1R+GSI)4种不同培养条件下CD34+细胞增殖、凋亡情况.并用实时定量PCR法检测培养后的AML组和对照组细胞内Hes1、Bcl-2 mRNA表达.结果 ①与对照组相比,AML组细胞Notch1、Hes1mRNA水平明显下降,Notch4 mRNA水平明显升高(P值均＜0.05).②在不同体外培养条件下,hD1R组、PBS组AML细胞总数分别为(0.74±0.13)×105、(2.16±0.21)×105,差异有统计学意义(t=5.70,P＜0.01).③hD1R组培养条件下,AML组、对照组细胞凋亡率分别为(18.48±2.51)％、(3.19±0.58)％,差异有统计学意义(t=5.94,P＜0.01).AML组不同培养条件下细胞凋亡率比较,hD1R组、5GF组较PBS组明显升高(P值均＜ 0.05),GSI组较hD1R组明显降低(P＜0.05).④hD1R蛋白明显上调AML细胞Hes1表达(P＜0.01),下调抗凋亡基因Bcl-2表达(P＜0.05).结论 hD1R蛋白可有效激活AML细胞内Notch信号,下调Bcl-2基因,抑制AML细胞增殖,促进细胞凋亡.
