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肿瘤坏死因子诱导U937细胞凋亡过程中IκB-α蛋白表达的研究
目的了解肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导U937细胞凋亡过程中IκB-α蛋白的表达、降解及亚细胞定位,并探讨其降解机制.方法用荧光显微镜观察TNF-α诱导细胞凋亡过程中U937细胞内IκB-α蛋白的表达及亚细胞定位,用流式细胞术分析IκB-α蛋白的变化及降解情况,并行蛋白酶抑制剂--对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基甲酮(TPCK)阻断实验,探讨细胞内IκB-α蛋白变化的可能机制;用流式细胞术分析U937细胞凋亡.结果①IκB-α分子多呈环状分布于整个胞浆,胞核内则无.②TNF-α刺激后,胞浆中仅见少许IκB-α分子,胞核内无;流式细胞术证实TNF-α刺激后一定时间内IκB-α蛋白表达水平逐渐降低.③TPCK阻断后,IκB-α分子仍呈环状分布于整个胞浆,胞核内则无.流式细胞术证实在对应时间内其表达明显高于TNF-α组.④TNF-α诱导的U937细胞凋亡率为(60.73±1.61)%.结论①在TNF-α诱导的U937细胞凋亡过程中,存在IκB-α蛋白降解,提示核因子-κB的激活.②IκB-α蛋白降解需TPCK敏感的蛋白酶参与.③TPCK敏感的蛋白酶也参与了TNF-α诱导U937细胞凋亡.
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过氧化酶体增殖物激活型受体γ对单核或巨噬细胞中抑制蛋白及基质金属蛋白酶-1表达的调控
目的:研究过氧化酶体增殖物激活型受体(PPAR)γ对人类单核或巨噬细胞核因子抑制蛋白(IkBα)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的调控影响,探讨PPARγ在抑制炎症反应和稳定动脉粥样斑块中的作用.方法:PPARγ配体(15-脱氧前列腺素J2和环格列酮)干预体外培养的U937细胞,用四唑盐(MTT)法检测细胞活力,细胞免疫组化法和流式细胞法检测细胞IkBα和MMP1的表达程度.结果:PPARγ配体在低浓度时不会影响细胞活力(存活率》80%);在1、3、24 h,PPARγ激活后均能增加IkBα在细胞内的表达,但是随着时间推移,这种作用逐渐减弱,与佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯阳性组相比,PPARγ配体组MMP1的表达水平下降(P《0.01).结论:PPARγ可能通过快速增加IkBα的表达而抑制核因子(NF-kB)的活性,同时PPARγ可通过或不通过NF-kB而抑制MMP1的表达,从而发挥抑制炎症和增强斑块稳定作用.
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核因子-кB在TNF-α诱导HL-60细胞凋亡中的作用
目的了解白血病细胞系HL-60中,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的核因子-кB(NF-кB)活化与细胞凋亡之间的关系.方法采用脂质体基因转染技术,将突变的核因子抑制蛋白(IкBα)质粒(pCMV4-IкBαs32/36A)转染HL-60细胞,于48 h后测其瞬时表达效应.用间接免疫荧光和Western bbt技术检测转染组和非转染组HL-60细胞的NF-кB活化状态,同时用流式细胞术和MTT法分别检测TNF-α对两组HL-60细胞的凋亡诱导及生长抑制效应.结果 TNF-α可诱导非转染组HL-60细胞的NF-кB活化,不能诱导转染组细胞的NF-кB活化,即突变型IкBα可特异性抑制HL-60细胞的NF-кB活化.结论用突变型IкBα特异性抑制HL-60细胞的NF-кB活化,能明显增加其对TNF-α的敏感性.
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呼吸机所致肺损伤家兔核因子-κB表达的意义
目的研究在呼吸机所致肺损伤(VILI)的炎症反应中加用呼气末正压(PEEP)对核因子-κB(NF-κB)的活性变化的影响.方法健康成年新西兰白兔30只随机分为3组:PEEP组(致伤通气+3 cm H2O PEEP)、ZEEP组(致伤通气+0 cm H2O PEEP组)和对照组(始终以正常条件通气).机械通气开始后4 h处死动物.采用Western-blot法检测家兔肺组织NF-κB及核因子抑制蛋白(IκB-α)的含量.结果家兔在致伤通气4 h后,肺组织NF-κB表达显著增加,而在致伤通气的同时加用PEEP,肺组织NF-κB表达明显减少.结论在机械通气过程中加用PEEP可通过减少NF-κB的表达保护肺组织减轻损伤.
