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Src激酶抑制剂ZD6474对白血病耐药细胞系K562/A02细胞增殖的影响及其作用机制探讨
目的 研究Src激酶抑制剂ZD6474对K562及其耐药株K562/A02细胞增殖的影响及其作用机制.方法 用不同浓度ZD6474处理K562、K562/A02细胞,观察细胞的增殖情况；用流式细胞术分析细胞周期的变化；用Western blot法分析ZD6474处理前后K562/A02细胞Src激酶及其磷酸化水平.用K562和K562/A02细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,待肿瘤直径达到0.5 ～1.0 cm,灌胃方法每天给予25、50及100 mg/kg ZD6474,生理盐水灌胃作为对照,观察ZD6474对裸鼠移植瘤的影响.并对移植瘤组织进行HE染色和免疫组化染色检测Src激酶表达(末次给药后24h)的改变.结果 ZD6474呈剂量依赖的方式抑制K562和K562/A02细胞增殖,作用48 h的IC50值分别为(1.61±0.07)μmol/L和(3.22±0.21) μmol/L.6μmol/L ZD6474分别作用K562和K562/A02细胞24 h,可以诱导G0/G1期细胞分别由(40.2±9.4)％、(25.0±7.0)％提高至(76.3±6.1)％、(54.2±6.6)％.6 μmol/L ZD6474可呈时间依赖方式抑制磷酸化(p)-Src和Src激酶的表达.用灌胃方法给予ZD6474,连续给药18 d,50 mg/kg ZD6474对K562和K562/A02移植瘤的抑制率分别为43.7％和56.3％.结论 ZD6474可通过抑制Src激酶磷酸化水平诱导K562/A02细胞凋亡；体内给药可抑制裸鼠移植瘤的生长.
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Src羧基端激酶抑制剂PP2对大鼠C6胶质瘤细胞生物学行为的影响及机制研究
目的：探讨Src羧基端激酶（C－terminal Src kinase，Src激酶）抑制剂PP2对大鼠C6胶质瘤细胞生物学行为的影响及其机制。方法用浓度为0（溶剂对照组）、2．5、5、7．5 mol／L PP2作用于C6胶质瘤细胞12 h后，分别采用CCK8、划痕实验、transwell基质胶侵袭实验观察PP2对C6胶质瘤细胞形态、增殖、侵袭和迁移的影响。免疫印迹法检测细胞核内β－catenin蛋白表达。结果不同浓度的PP2作用于C6胶质瘤细胞12 h后均能诱导细胞聚集并产生明显的形态改变，且浓度越高，聚集效果越明显。 PP2作用于C6胶质瘤细胞12 h后可明显抑制其增殖、迁移和侵袭，且呈浓度相关性，同时，细胞核内p－β－catenin蛋白表达明显减少。结论 Src激酶抑制剂PP2可能通过减少细胞核内p－β－catenin蛋白表达，从而有效抑制C6胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。
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Src 激酶抑制剂 ZD6474 对乳腺癌 MCF-7细胞增殖的影响及机制
目的 探讨Src激酶抑制剂ZD6474对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及机制. 方法 取对数生长期的MCF-7细胞,分别加入1 ×10 -6 mol/L、1 ×10 -5 mol/L、1 ×10 -4 mol/L、1 ×10 -3 mol/L、1 ×10 -2 mol/L的Src激酶抑制剂ZD6474. 采用MTT法测算细胞增殖抑制率. 采用Transwell法检测MCF-7细胞体外侵袭能力. 采用Western blotting法检测E-钙黏素(E-cadherin)及β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达. 采用报告基因技术检测Snail启动子的转录活性. 采用real-time PCR法检测E-cadherin 和β-catenin mRNA表达. 结果 ZD6474 作用浓度为1 ×10 -5 mol/L和1 ×10 -4 mol/L时,细胞增殖抑制率分别为12 .2%和27 .5%. MCF-7细胞经ZD6474处理后,体外侵袭能力明显下降,1 ×10 -6 mol /L、1 ×10 -5 mol/L、1 ×10 -4 mol/L、1 ×10 -3 mol/L、1 ×10 -2 mol /LZD6474作用MCF-7细胞体外侵袭能力分别为8.3%、14.2%、32.6%、51.4%、76.5%. Src激酶抑制剂作用后E-cadherin mRNA和蛋白表达上调,β-catenin mRNA和蛋白表达及Snail启动子转录活性下调. 结论 Src蛋白激酶抑制剂ZD6474可抑制乳腺癌细胞增殖,其机制可能通过上调E-caherin表达,下调β-catenin表达,减弱Snail启动子转录活性,从而抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移.
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Src激酶抑制剂CGP77675对TGF-β1诱导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化的抑制作用
目的 探讨Src激酶抑制剂CGP77675 (CGP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞上皮-间质转化(EMT)过程的作用及其机制.方法 将培养的人RPE细胞株(ARPE19)分为对照组、TGF-β1处理组和TGF-β1 +CGP处理组,并根据分组用相应药物处理细胞.细胞体外培养后3d于光学显微镜下观察各组细胞的形态变化;分别采用实时荧光定量PCR法、Western blot法和免疫荧光染色法检测各组细胞中EMT相关基因及其蛋白的表达变化,包括细胞中纤溶酶原激活物抑制蛋白-1(PAI1)和纤连蛋白-1(FN1)的相对表达量及上皮细胞中闭锁小带蛋白1(ZO1)和细胞骨架蛋白F-肌动蛋白(F-actin)的分布;采用MTT法检测各组细胞的增生率;采用划痕试验检测各组细胞的迁移能力. 结果 对照组ARPE19细胞呈上皮样形态,F-actin和ZO1沿细胞膜表达;TGF-β1处理组细胞为纤维样,F-actin表达的排列紊乱,细胞膜上ZO1表达不连续.TGF-β1+CGP处理组细胞维持上皮样形态,F-actin和ZO1表达清晰且完整.对照组、TGF-β1处理组和TGF-β1+CGP处理组细胞中FN1 mRNA和PAI1 mRNA相对表达量总体比较差异均有统计学意义(F=33.14、82.92,均P＜0.01),对照组细胞中FN1 mRNA和PAI1 mRNA相对表达量为0.211±0.080和0.116±0.073,TGF-β1+ CGP处理组细胞中FN1 mRNA和PAI1 mRNA相对表达量分别为0.368±0.097和0.362±0.048,均明显低于TGF-β1处理组的1.000±0.001和1.000±0.001,差异均有统计学意义(均P＜0.05).3个组细胞中FN1和PAI1蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义(F=181.90、48.85,均P＜0.01),对照组细胞中FN1和PAI1蛋白相对表达量分别为0.166±0.055和0.327±0.066,TGF-β1+CGP处理组FN1和PAI1蛋白相对表达量分别为0.143±0.030和0.260±0.077,均明显低于TGF-β1处理组的1.000±0.001和1.000±0.001,差异均有统计学意义(均P＜0.05).细胞处理后3d,TGF-β1 +CGP处理组细胞增生率为(79.30±3.44)％,与对照组的(99.50±1.00)％和TGF-β1处理组的(95.10±4.20)％比较均明显下降,差异均有统计学意义(均P＜0.01);处理后7d,TGF-β1+CGP处理组细胞增生率为(54.80±7.39)％,明显低于TGF-β1处理组的(92.10±4.50)％和对照组的(99.10±0.50)％,差异均有统计学意义(均P=0.004).细胞划痕试验显示,TGF-β1处理组细胞迁移能力明显增强,TGF-β1+CGP处理组划痕宽度无明显变化. 结论 Src激酶抑制剂CGP能够抑制由TGF-β1诱导的ARPE19细胞EMT,提示Src信号通路与EMT过程有关.
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Src激酶抑制剂PP2对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞迁移和侵袭能力的影响
目的 探讨Src激酶抑制剂PP2对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 将对数生长期的Tca8113细胞分为0、1、5、10、20μmol·L-1 PP2组,分别加入0、1、5、10、20μmol·L-1 Src激酶抑制剂PP2进行培养,采用划痕实验和Transwell迁移实验检测Tca8113细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测Tca8113细胞的体外侵袭能力.结果 PP2作用24 h时,0、1、5、10、20μmol·L-1 PP2组细胞迁移率随PP2浓度的增加逐渐降低(P<0.05),穿膜细胞数随PP2浓度的增加逐渐减少(P<0.05),细胞侵袭个数随PP2浓度的增加逐渐减少(P<0.05).结论 Src激酶抑制剂PP2可以抑制人舌鳞状细胞癌细胞Tca8113的迁移和侵袭能力.
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Src 激酶抑制剂 ZD6474在乳腺癌 MCF －7细胞转移中的作用和机制
目的：探讨 Src 激酶抑制剂 ZD6474在乳腺癌 MCF －7细胞转移中的作用和机制。方法：乳腺癌 MCF－7细胞经 ZD6474处理后，检测肿瘤细胞体外黏附、侵袭能力的改变，应用 Western blot 及 Real －time PCR 观察细胞 Src 激酶磷酸化水平及 E －钙黏素和β－连环蛋白表达的变化，报告基因技术检测 Snail 在转录水平表达的变化。结果：ZD6474可抑制 MCF －7细胞中 Src 激酶活性，在 ZD6474浓度为1×10－5 mol／L 和1×10－4 mol／L 时，细胞的抑制率分别为12．2％和27．5％。Src 酪氨酸激酶抑制剂可上调 E －cadherin 在 mRNA 和蛋白表达水平，下调β－catenin 在 mRNA 和蛋白表达水平及 Snail 启动子活性。结论：Src 激酶与乳腺癌 MCF －7细胞肿瘤转移能力密切相关，阻断 Src 激酶活性可抑制肿瘤细胞转移能力。
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Src激酶抑制剂对人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP多药耐药性的影响及机制
目的 研究Src激酶抑制剂PP2对人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP多药耐药性的影响及机制.方法 以5和10 μmol·L-1 Src激酶抑制剂PP2作用A549/DDP细胞24 h后,应用Western blot考察肿瘤细胞Src磷酸化表达的变化,MTT法检测细胞的药物敏感性,流式细胞仪考察细胞P-gp表达的变化,Western blot及Real-time PCR考察肿瘤细胞MDR1蛋白及mRNA表达的变化.结果 Src激酶抑制剂PP2可下调A549/DDP细胞Src磷酸化表达,5和10 μmol·L-1 Src激酶抑制剂PP2作用后,顺铂对A549/DDP细胞的药物敏感性分别提高了1.37和2.47倍,细胞P-gp表达分别为对照组的65.2%和46.4%,MDR1在蛋白水平表达显著降低,MDR1在mRNA水平的表达分别为对照组的50.24% (P<0.05)和37.6%(P<0.05).结论 Src激酶抑制剂PP2可逆转A549/DDP细胞多药耐药性,其机制可能与降低细胞MDR1表达水平有关.
