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附子水溶性生物碱提取纯化工艺研究
目的 研究附子水溶性生物碱的提取纯化工艺.方法 采用UPLC-MS/MS技术,以14种生物碱(多根乌头碱、宋果灵、附子灵、尼奥灵、塔拉萨敏、新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、乌头碱、次乌头碱)的总量为考察指标,采用单因素实验和正交试验方法筛选佳提取工艺;以8种水溶性生物碱(乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱、附子灵、尼奥灵、塔拉萨敏、宋果灵、多根乌头碱)的量为考察指标,对5种大孔树脂吸附和解吸附性能进行考察,优选佳纯化工艺.结果 佳提取纯化工艺为蒸附片加10倍量pH值3.5的酸水,煎煮3次(维持pH值约3.5),每次2h,合并水煎液,用20％ NaOH溶液调pH值10.0,加热回流水解2h后,放冷,调pH值11.0,上大孔树脂HPD 300,上样量为生药2.5 g/mL树脂,6 BV水洗除杂,4 BV 80％乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,减压浓缩干燥,即得附子水溶性生物碱提取物.该提取物收率为1.69％,其中新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、附子灵、尼奥灵、塔拉萨敏、多根乌头碱、宋果灵的总量高达约15％.结论 优选得到的提取纯化工艺稳定可行,为附子水溶性生物碱的研究应用提供参考.
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HPLC-ELSD法测定附子水溶性生物碱提取物和蒸附片中5种生物碱的含量
目的:建立同时测定附子水溶性生物碱提取物和蒸附片中新乌头原碱、次乌头原碱、附子灵、尼奥灵、宋果灵含量的方法.方法:采用HPLC-ELSD法,Extend C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.1％三乙胺水溶液(B),梯度洗脱(0～8 min,10％A→20％A;8～15 min,20％A→25％A;15～25 min,25％A→25％A;25～30 min,25％A→28％A;30～31 min,28％A→60％A;31～42 min,60％A→65％A),流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,蒸发光散射检测器(蒸发温度50℃,载气流速1.5 L· min-1,增益为1).结果:在此色谱条件下,5种生物碱分离度良好,新乌头原碱、次乌头原碱、附子灵、尼奥灵、宋果灵分别质量浓度在50.01～500.08、30.00～300.02、30.01～300.13、50.01～500.07、15.00～150.04 μg·mL-1范围内线性关系良好(r≥0.999 1);平均加样回收率(n=6)分别为98.2％(RSD=1.9％),98.3％(RSD=1.6％),98.5％(RSD=1.3％),97.2％(RSD=1.3％),97.7％(RSD=1.7％).结论:该方法简便、准确,可用于附子水溶性生物碱提取物与蒸附片的质量控制与评价.
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附子煎煮过程中13种生物碱含量的动态变化规律研究
目的:采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱,精确测定附子水煎液中酯型生物碱、原碱、去甲猪毛菜碱等成分的含量,探讨附子煎煮过程中13种生物碱的动态变化规律,为临床应用和炮制提供参考.方法:采用Agilent SB-C1s色谱柱(2.1 mm×20mm,1.8μm),以2 mmol·L-1醋酸铵溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0.4 mL·min-,柱温35℃;质谱采用ESI+离子源,多反应监测模式(MRM),检测13种生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱、附子灵、多根乌头碱、宋果灵、去甲猪毛菜碱)以及内标氢溴酸高乌甲素的定量离子和定性离子.结果:生附片煎煮过程中双酯型生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱)含量迅速降低,4h后趋于稳定且含量很低;单酯型生物碱(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)含量先升后降,于4～6h达到高峰;原碱中乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱含量一直快速增加,而附子灵、宋果灵、多根乌头碱和去甲猪毛菜碱含量缓慢增加,约在4h达到高峰,后趋于稳定或略有降低.黑顺片煎煮过程中生物碱成分的动态变化趋势与生附片相似,但变化幅度显著小于生附片.结论:生附片煎煮2～4h,双酯型生物碱含量已很低,能保证临床用药安全,且总生物碱等主要成分的含量显著高于黑顺片水煎液.
