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吉九里香碱诱导K562细胞凋亡的研究
目的 探讨吉九里香碱(girinimbine)通过诱导细胞凋亡而发挥其抑制肿瘤细胞增殖的作用.方法 采用MTT法检测吉九里香碱对K562细胞增殖的抑制作用;采用荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;库尔特全自动颗粒粒度仪分析药物引起K562细胞体积大小分布的变化;琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯形条带及流式细胞术检测细胞凋亡时凋亡峰的变化.结果 MTT结果显示不同浓度的吉九里香碱处理K562细胞不同时间均能抑制细胞的增殖,抑制率依赖于吉九里香碱的浓度和作用时间;50 μmol/L吉九里香碱处理K562细胞24 h时,细胞出现凋亡典型的形态学特征;50 μmol/L吉九里香碱分别处理K562细胞6、12、24 h及不同浓度吉九里香碱处理K562细胞24 h时,能够使细胞产生明显的DNA梯形条带和体积大小变化,呈一定的量效和时效关系,并且细胞凋亡的亚G1峰随作用时间的延长而增加,分别为(15.93±3.79)%(6 h)、(32.87±4.89)%(12 h)、(41.30±1.91)%(24 h).结论 吉九里香碱可能通过诱导K562细胞凋亡而发挥其抗K562细胞增殖的作用.
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吉九里香碱体外诱导人大肠癌HCT-15细胞凋亡的机理研究
目的:探讨中药单体吉九里香碱体外诱导HCT - 15细胞凋亡的分子作用机理.方法:采用Western Blotting、体外Bcl xL蛋白竞争结合检测实验及RT - PCR对吉九里香碱诱导细胞凋亡的机制进行研究.结果:结果显示50 μmol·L-1吉九里香碱分别作用HCT - 15细胞6h、12h及24h,P53蛋白表达水平基本没有变化；Cyto c呈时效性的从线粒体释放到胞质中,Bcl 2蛋白表达基本没有变化,Bcl - xL的表达被抑制在较低水平,吉九里香碱处理细胞6h后Bax表达开始增加,Bax与Bcl - xL蛋白表达的相对比例上调；与死亡受体通路中相关的FADD表达未见异常,同时线粒体通路中的蛋白包括Caspase -7、Caspase-8、Caspase -9、Caspase -3等均没有被剪切,但相应的凋亡标志物PARP和Rb等以时间依赖形式被剪切；RT - PCR检测结果显示Bcl -2的mRNA水平基本不变,而Bax的mRNA水平随时间的增加而略有增加,说明吉九里香碱从基因水平影响Bax靶基因的转录表达；另外,吉九里香碱能明显竞争BH3与Bcl - xL蛋白的结合,强度甚至强于阳性药HA14 -1.结论:吉九里香碱诱发HCT - 15细胞凋亡的分子机制在于从基因水平影响Bax靶基因的转录表达,同时通过与Bcl - xL蛋白的BH3结构域特异性结合置换出Bax蛋白以增加Bax同源二聚体的浓度,进而影响二者的蛋白表达水平比例,终导致线粒体功能紊乱来发挥其诱导HCT - 15细胞凋亡的效应,且为P53和Caspases非依赖型.
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吉九里香碱体外诱导HCT-15细胞凋亡的研究
目的:探讨中药单体吉九里香碱是否通过诱导HCT-15细胞凋亡而发挥其抑制肿瘤细胞增殖的作用.方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制作用;采用透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;库尔特全自动颗粒粒度分析药物引起HCT-15细胞体积大小分布的变化;琼脂糖凝胶电泳测定DNA ladder的发生;通过流式细胞仪应用Annexin V-FITC和Rhodaminel23检测磷脂酰丝氨酸(PS)及线粒体跨膜电位(Δψ,m).结果:MTT结果显示吉九里香碱以浓度和时间依赖方式抑制HCT-15细胞的增殖,抑制率依赖于吉九里香碱的浓度和作用时间;50 μmol·L-1吉九里香碱处理HCT-15细胞24 h时,细胞出现凋亡典型的形态学特征;50 μmol·L-1吉九里香碱分别处理HCT-15细胞6,12,24 h及不同浓度吉九里香碱处理HCT-15细胞24 h时,能够使细胞产生明显的DNA ladder和体积大小变化,呈一定的量效和时效关系;细胞PS外翻随作用时间的延长而增加,分别为15.34%(6 h),20.20%(12 h),39.37%(24 h);50 μmol·L-1吉九里香碱处理HCT-15细胞导致线粒体Δψm以时间依赖方式下降.结论:吉九里香碱通过诱导HCT-15细胞凋亡而发挥其抗HCT-15细胞增殖的作用,致凋亡机理可能与线粒体△ψm快速下降有关.
