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邻苯二甲酸-单-乙基己基酯对原代培养新生大鼠下丘脑神经元活性的影响及其氧化损伤作用
目的 探讨邻苯二甲酸-单-乙基己基酯[mono-(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]对原代培养新生大鼠下丘脑神经元活性的影响及其氧化损伤作用.方法 选取24 h内新生清洁级SD大鼠,取下丘脑神经元进行原代培养,分别加入含终浓度0(溶剂对照)、10-12、10-9、10-6、10-3、1.0 mmol/L MEHP的培养液暴露24 h.采用MTT法测定下丘脑神经元的活性,试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)的活力和丙二醛(MDA)的含量.结果 与溶剂对照组比较,仅1.0 mmol/L MEHP暴露组新生大鼠下丘脑神经元的存活率较低,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着MEHP暴露剂量的升高,新生大鼠下丘脑神经元的存活率呈下降趋势.与溶剂对照组比较,仅1.0 mmol/L MEHP暴露组新生大鼠下丘脑神经元上清液中的MDA含量升高,差异有统计学意义(P＜0.05);而各MEHP暴露组新生大鼠下丘脑神经元上清液中的SOD活力均无明显改变.结论 MEHP可抑制原代培养新生大鼠下丘脑神经元活性,并具有氧化损伤作用,提示其可能是MEHP神经毒性机制之一.
关键词： 邻苯二甲酸-单-乙基己基酯 原代培养 下丘脑神经元 神经元活力 氧化损伤 -
醒脑静注射液组分促进缺氧复氧胶质细胞清除胞外谷氨酸提高缺氧神经元活力的研究
[目的]研究醒脑静注射液(XNJI)8种成分促进缺氧复氧(Hypo/Reox)星形胶质细胞对胞外高浓度谷氨酸的清除,及其条件培养液对缺氧后神经元活力的影响.[方法]体外培养大鼠星形胶质细胞,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光鉴定.采用环磷酸腺苷(dBcAMP)和Hypo/Reox诱导胶质细胞活化并进行造模,Cell Counting Kit-8(CCK-8)测定细胞活力;谷氨酸试剂盒检测细胞培养液中谷氨酸浓度,并利用此条件培养液培养缺氧神经元,CCK-8法测神经元活力.[结果]胶质细胞体外培养成功,GFAP染色阳性.dBcAMP 0.0625 mmol/L协同缺氧4 h复氧3 h(Hypo 4 h/Reox 3 h)处理后胶质细胞对胞外高浓度谷氨酸的清除能力显著降低.XNJI组分β-榄香烯、吉马酮、龙脑、冰片能显著提高受损胶质细胞对胞外谷氨酸的清除能力;XNJI组分吉马酮、龙脑、冰片处理的胶质细胞条件培养液能显著提高缺氧神经元的活力.[结论]XNJI组分能促进缺氧复氧胶质细胞对谷氨酸的清除并提高神经元活力.
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脂肪乳剂减轻布比卡因抑制原代培养海马神经元活力
目的 研究脂肪乳剂对布比卡因致原代培养海马神经元神经毒性的影响.方法 选择原代培养第8天的海马神经元,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法计算布比卡因对海马神经元的半抑制浓度(IC50),用接近IC50的3个浓度分别作用12 h、24 h和36 h,MTT法检测神经元活力,观察布比卡因对海马神经元的神经毒性作用,得出佳布比卡因浓度和作用时间进行后续实验.将原代海马神经元细胞分为四组(n=3):空白对照组(C组)不做任何处理;布比卡因组(B组)加入布比卡因;脂肪乳剂组(L组)加入1％ 脂肪乳剂;布比卡因+脂肪乳剂组(BL组)加入布比卡因和1％脂肪乳剂.各组均处理一定时间后光学显微镜观察海马神经元生长状态,检测各组神经元活力,免疫荧光染色法检测裂解半胱天冬酶-3(cleaved caspase-3)的表达并统计cleaved caspase-3阳性神经元占神经元总数的比例.结果 布比卡因的IC50为0.03362％,摩尔浓度为980.4μM.选择布比卡因浓度为1 mmol/L和作用时间为24 h进行后续实验.与C组比较,B组海马神经元细胞活力明显减弱(P<0.01).与B组比较,L组和BL组海马神经元细胞活力明显增强(P<0.01).与C组比较,B组和BL组cleaved caspase-3阳性率明显升高(P<0.01),与B组比较,BL组神经元cleaved caspase-3阳性率明显降低(P<0.01),C组和L组cleaved caspase-3阳性率差异无统计学意义.结论 布比卡因诱发海马神经元神经毒性呈浓度剂量和时间依赖性,脂肪乳剂减轻布比卡因的神经毒性可能与增加海马神经元的细胞活力有关.
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烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1基因对原代培养小鼠神经元活力的影响
目的 评价烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNA T1)基因对原代培养小鼠神经元活力的影响.方法 取原代培养神经元,分成正常对照组、过表达NMNA T1慢病毒感染组、RNA干扰慢病毒感染组,后两组分别感染小鼠NMNA T1基因的过表达和RNA干扰慢病毒颗粒以上调和下调NMNA T1基因的表达水平.应用MTT染色观察各组原代培养小鼠神经元活力的变化.结果 与正常对照组原代培养小鼠神经元活力比较,过表达NMNA T1慢病毒感染组神经元的细胞活力显著增强,而RNA干扰慢病毒感染组神经元的细胞活力受到严重干扰,差异有统计学意义(P=0.025,P=0.027).结论 NMNA T1基因在神经元发育过程中起重要作用,其缺失可能导致中枢神经系统的神经退化.
