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miR-23b-3p在皮肌炎血清中的表达与临床意义
目的:研究miR-23b-3p在皮肌炎(DM)患者血清中的表达水平,探讨其在DM中的临床意义.方法:收集2011年3月～2016年2月我院风湿免疫科住院的DM患者(活动期)血清49例,健康对照血清30例,提取血清总RNA,采用实时荧光定量PCR方法检测血清中miR-23b-3p相对表达量,分析与临床特征的相关性.结果:DM患者血清miR-23b-3p相对表达量(1.98±0.86)显著低于健康对照组(3.02±1.13,P＜0.01),DM合并“技工手”患者血清miR-23b-3p表达水平显著低于未合并“技工手”患者(P＜0.05).相关性分析显示,miR-23b-3p与肌酸激酶(CK)呈负相关(r=-0.286,P＜0.05),与乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)等实验室指标无相关性.结论:DM患者中miR-23b-3p表达下调可能通过多个环节参与DM的发病过程.
关键词： 皮肌炎 miR-23b-3p 肌酸激酶 -
苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制载脂蛋白(a)表达
目的 研究苦瓜蛋白(MD28)对HepG2细胞载脂蛋白(a)[Apo(a)]表达的影响,探索其作用机制.方法 离心、超滤、透析、阳离子交换色谱、反相高效液相色谱等方法提取苦瓜蛋白;MTT法检测苦瓜蛋白处理HepG2细胞后细胞存活率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测Apo(a)、法尼酯X受体(FXR)、肝细胞核因子4α (HNF40α)的mRNA和蛋白表达水平;qRT-PCR检测hsa-miR-23b-3p的表达水平,采用小于扰RNA转染沉默FXR.结果 与对照组相比,0.1、0.2、0.4、0.8及1.6 g/L苦瓜蛋白处理HepG2细胞24 h,细胞存活率无统计学差异;与对照组相比,苦瓜蛋白呈剂量和时间依赖性抑制Apo(a)表达,以1.6 g/L苦瓜蛋白作用48 h的效果为显著;苦瓜蛋白上调FXR和hsa-miR-23b-3p表达水平,下调HNF4α表达水平,沉默FXR则逆转苦瓜蛋白的上述作用,沉默hsa-miR-23b-3p能逆转苦瓜蛋白对HNF4αα的下调作用,但对FXR的表达无影响.结论 苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制HepG2细胞Apo (a)的表达,有望成为临床降低脂蛋白(a)的候选药物.
关键词： 载脂蛋白(a) 法尼酯X受体 肝细胞核因子4α 苦瓜蛋白 miR-23b-3p -
胆酸通过上调miR-23b-3p抑制载脂蛋白A表达
目的 分析胆酸降载脂蛋白A (ApoA)效应与miR-23b-3p的关系,研究胆酸降ApoA作用新机制.方法 首先用生物信息学在线工具对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子肝细胞核因子4γ (HNF4γ)进行靶基因分析,使用荧光素酶报告系统对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子HNF4γ进行靶基因验证实验,Western blot检测ApoA表达水平、p38MAPK(MAPK:丝裂原活化蛋白激酶)及p-p38MAPK,实时定量PCR检测miR-23b-3p表达水平.结果 生物信息学分析表明HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因,荧光素酶报告系统转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组,验证了HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因.胆酸呈剂量和时间依赖性抑制HepG2细胞ApoA的表达,以32 mg/L和24h的作用显著.胆酸抑制ApoA表达与活化MAPK和上调miR-23b-3p有关.结论 胆酸呈剂量和时间依赖性地下调HepG2细胞ApoA表达水平;胆酸降ApoA与上调miR-23b-3p有关.
关键词： 胆酸 载脂蛋白a HepG2细胞 miR-23b-3p -
miR-23b-3p对肝核因子4的靶基因及效用分析
目的 探索miR-23b-3p是否以肝核因子4作为靶基因并下调apo(a)表达,为降高脂蛋白(a)血症提供新的思路.方法 用Targetscan在线工具对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子肝核因子4(HNF4)进行靶基因分析;在JM109细胞中使用荧光素酶报告系统对miR-23b-3p与调控筛选调控LPA基因的转录因子HNF4进行靶基因进行验证实验;用RT-PCR检测HepG2细胞apo (a) mRNA表达水平.结果 Targetscan生物信息学分析工具表明HNF4G可作为miR-23b-3p的靶基因,荧光素酶报告系统转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组,miR-23b-3p的抑制剂可抑制其作用,验证了HNF4G可作为miR-23b-3p的靶基因.转染miR-23b-3p可抑制HepG2细胞apo(a) mRNA的表达.结论 miR-23b-3p以HNF4为其靶基因,并下调HepG2细胞apo(a)的表达.
关键词： 载脂蛋白(a) 靶基因 miR-23b-3p 肝核因子4 -
miR-23b-3p调控脂蛋白(a)抑制同型半胱氨酸诱导的冠状动脉血管内皮细胞损伤
目的 探讨miR-23b-3p作为一种高效降低载脂蛋白(a)[apolipoprotein (a),Apo(a)]的内源性miR,对高同型半胱氨酸引起的冠状动脉内皮细胞损伤抑制效果及作用机制.方法 通过生物信息学、miR芯片及基础实验筛选ETS1为靶基因,设计miR-23b-3p mimic/inhibitor.构建pmirGLO-ETS1 3'-UTR质粒分6组转染人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HCAECs),分别为A组(pmirGLO-ETS1 3'-UTR转染)、B组(miR-23b-3p inhibitor+pmirGLO-ETS1 3'-UTR转染)、C组(miR-23b-3p minics+pmirGLO-ETS13'-UTR转染)、D组(pmirGLO-ETS13'-UTR mut转染)、E组(miR-23b-3p minics+ pmirGLO-ETS13'-UTR mut转染)和F组(miR-23b-3p inhibitor+pmirGLO-ETS13'-UTR mut转染),经双荧光素酶报告基因实验验证.HCAECs分为:对照组(无干预)、阴性对照组(miR-23b-3p inhibitor转染)和实验组(miR-23b-3p mimic转染).3组细胞均置于含1.0 mmol/L同型半胱氨酸(homocysteine,hcy)培养基中培养7d.检测各组HCAECs存活率、miR-23b-3p和Apo (a) mRNA表达、akt、p-akt和eNOS蛋白表达.结果 双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p能够和ETS13'-UTR直接结合,可得ETS1是miR-23b-3p直接靶基因.实验组HCAECs存活率(66.22±5.17)％、阴性对照组(42.12±2.35)％和对照组(38.36±2.21)％均显著低于正常HCAECs(P＜0.01),实验组HCAECs存活率显著高于阴性对照组和对照组(P＜0.01).转染后,实验组miR-23b-3p mRNA表达显著高于阴性对照组和对照组(P＜0.01),实验组Apo (a) mRNA表达显著低于阴性对照组和对照组(P＜0.01).转染后,实验组p-akt表达和eNOS蛋白相对表达显著高于阴性对照组和对照组(P＜0.01).结论 miR-23b-3p能够以ETS1为靶基因,可能通过akt/eNOS信号通路下调hcy诱导损伤的内皮细胞中Apo(a)表达,从而保护冠状动脉血管内皮细胞.
关键词： miR-23b-3p 脂蛋白(a) 同型半胱氨酸 内皮细胞 -
儿童原发性肾病综合征患者尿液外泌体miR-23b-3p水平变化及其临床意义
目的 检测尿液外泌体miR-23b-3p在儿童原发性肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)患者中的水平,评估其作为NS辅助诊断指标的临床价值.方法 收集2017年3～11月在解放军东部战区总医院住院并确诊的98例NS患儿(NS组)和南京医科大学附属儿童医院95例年龄、性别相匹配的健康儿童(对照组)的晨尿标本及临床资料.实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测miR-23b-3p在尿液外泌体中的含量.应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)、相关性分析等评估其作为儿童NS诊断指标的临床价值.结果 miR-23b-3p在NS组尿液外泌体中的浓度明显高于对照组[13.44(4.47,31.40)fmol/L vs 3.94(2.76,7.15)fmol/L,差异有统计学意义,U=1899,P<0.0001],且在治疗缓解后显著下降[10.62(4.38,37.72)fmol/L vs 2.84(1.53,4.92)fmol/L,W=695,P<0.0001].miR-23b-3p诊断NS的ROC曲线下面积(AUC)为0.796(95％CI:0.734～0.858),敏感度为84.7％,特异度为64.2％.相关性分析显示,NS患儿尿液外泌体miR-23b-3p与血清总蛋白(r=-0.377)、清蛋白(r=-0.309)水平呈显著负相关,与血清总胆固醇(r=0.266)、三酰甘油(r=0.318)呈显著正相关,差异均具有统计学意义(均P<0.01).结论 miR-23b-3p在NS患儿尿液外泌体中的含量显著升高,且在治疗缓解后明显降低,有望作为儿童NS辅助诊断和治疗效果监测的潜在指标.
关键词： 儿童原发性肾病综合征 尿液 外泌体 miR-23b-3p
