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人喉癌细胞异质性的研究
目的:通过原代培养人喉癌实体瘤细胞,克隆分离异质性细胞亚群.初步研究喉癌细胞肿瘤异质性.方法:原代培养人喉癌细胞,应用有限稀释法对体外培养的喉癌细胞进行单细胞克隆分离异质性亚群,比较其在形态、分化能力、细胞周期、增殖能力及裸鼠异体移植成瘤能力等方面的差异.结果:分离到1型和2型细胞形态差异大的两个亚群.1型细胞成长梭形,突起少,亚克隆培养未产生子代细胞,裸鼠异体移植不成瘤(0/5);2型细胞成多角形,多突起,继续培养产生的予代克隆出现异质性细胞,裸鼠异体移植可成瘤(5/5),体外增值能力强,处于细胞周期G0/G1的比例明显高于1型细胞.结论:原发性人喉癌实体瘤细胞具有异质性,2型细胞具有肿瘤干细胞的特性.
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人喉癌细胞系Hep-2中CD133阳性肿瘤干细胞的分离及意义
目的:研究喉癌细胞系Hep-2中CD133的表达;比较CD 133+细胞、未分选细胞、CD133细胞的体外增殖、克隆形成能力及其在裸鼠体内的成瘤能力;探讨喉癌肝细胞对化疗药物顺铂(cisplatin,DDP)的抵抗作用.方法:采用流式细胞仪检测CD133在Hep-2细胞系中的表达;免疫磁珠分选技术纯化CD133阳性肿瘤细胞;使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和平板克隆形成实验检测分选所得各细胞亚群细胞以及未分选细胞的体外增殖能力和克隆形成能力;将CD133阳性肿瘤细胞和CD133阴性肿瘤细胞以一定的数量级注入重症联合免疫缺陷小鼠腹部皮下,比较其成瘤差异性;此外,使用DDP干预分选所得各细胞亚群细胞,检测比较CD133阳性肿瘤细胞和CD133阴性肿瘤细胞的体外增殖能力与体内成瘤能力.结果:流式细胞仪示CD133在Hep-2细胞系中呈微量恒定表达,表达概率为40.12± 1.32 ％;CD133阳性肿瘤细胞的体外增殖能力显著强于CD133阴性肿瘤细胞的增殖能力(P＜0.05),且其克隆形成能力也强于CD133阴性肿瘤细胞;体内成瘤实验结果显示CD133阳性肿瘤细胞较CD133阴性细胞、未分选细胞在重症联合免疫缺陷小鼠体内具有更强的成瘤性(P＜0.05);在DDP的干预下,相对于CD133阴性肿瘤细胞,CD133阳性肿瘤细胞表现出更强的抵抗力.结论:喉癌Hep-2细胞系中,CD133阳性癌细胞具有强的体外增殖能力、体内成瘤能力且对化疗药物具有较强的抵抗性,可作为喉癌肿瘤干细胞的标志之一.
关键词： Hep-2人喉癌细胞系 CD133 裸鼠 顺铂 喉癌实体瘤
