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芹菜素对裸鼠肝癌皮下移植瘤抑制作用的研究
目的 探讨芹菜素(APG)对裸鼠肝癌皮下移植瘤的抑制作用及其相关机制.方法 建立人肝癌阿霉素(ADM)耐药细胞BEL-7402/ADM裸鼠皮下移植瘤模型,24只移植成功的裸鼠随机分为三组:对照组(ADM 3 mg/kg)、APG组(APG 50 mg/kg+ADM 3 mg/kg)和miR-101 mimics组(miR-101 mimics 50 mg/kg+ADM 3 mg/kg),每组8只.上述药物每3天注射1次,共7次.给药结束后处死裸鼠,切取移植瘤组织.免疫组化法检测Ki-67蛋白表达评价肿瘤细胞增殖,免疫蛋白印迹法检测肿瘤组织核转录因子红细胞系相关因子-2(Nrf2)蛋白的表达,qRT-PCR法测定移植瘤组织miR-101水平.结果 与对照组相比,APG和miR-101 mimics能显著抑制肿瘤生长(P＜0.05),抑制肿瘤细胞增殖(P＜ 0.05或P＜0.01),此外,APG和miR-101 mimics还能下调肿瘤组织Nrf2蛋白的表达(P＜0.01),上调miR-101表达(P＜ 0.05).结论 APG能有效抑制肝癌移植瘤生长,其机制可能与抑制肿瘤细胞增殖,上调miR-101表达和下调Nrf2表达有关.
关键词： 芹菜素 肝癌 化疗增敏 核转录因子红细胞系相关因子-2 miR-101 -
核转录因子红细胞系相关因子-2干扰质粒构建及鉴定
目的 设计及构建小鼠核转录因子红细胞系相关因子-2(Nrf2)基因的干扰质粒,并筛选出效果好的干扰质粒.方法 设计3组针对Nrf2基因的核糖核酸干扰(RNAi)序列,应用基因重组技术克隆入载体中构建短发夹RNA(shRNA),分别为shRNA1、shRNA2及shRNA3,通过基因测序鉴定,经Lipofectamine 2000转染至BV2细胞,实时PCR检测Nrf2 mRNA的表达,Western Blot法检测Nrf2蛋白的表达.结果 测序表明,克隆入载体中的Nrf2干扰序列及读码框完全正确,实时PCR及Western Blot显示shRNA3干扰效果强.结论 成功构建小鼠Nrf2的有效干扰质粒,为Nrf2信号通路在脑卒中领域的功能研究奠定了基础.
关键词： 核转录因子红细胞系相关因子-2 RNA干扰 BV2细胞
