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miR-140-5p调控FGF9在拇外翻中的作用
目的 探讨miR-140-5p调控FGF9在拇外翻中的作用,从基因层面阐明拇外翻的发病机制,为临床预防和治疗拇外翻提供基础理论依据.方法 收集2013～2015年于抚顺市中心医院就诊的拇外翻患者(10例)和非拇外翻患者(5例)的第一跖骨内侧骨组织及表面软组织样本,运用Western blot以及real-time PCR检测各组织中miR-140-5p和FGF9的表达,并对其表达差异进行分析.利用人成骨细胞系hFOB1.19对骨保护素(OPG)和骨钙素(OCN)进行Western blot分析,验证miR-140-5p和FGF9的调控关系和对成骨细胞成骨能力的影响.结果 拇外翻患者第一跖趾关节与非拇外翻患者比较,miR-140-5p表达显著下降(P=0.0065),FGF9表达明显增高(P=0.0055).上调miR-140-5p后FGF9 mRNA表达显著下降(P=0.0050),而下调miR-140-5p后FGF9 mRNA表达显著增加(P=0.0035).与未转染组比较上调miR-140-5p后OPG(P=0.0045)和OCN蛋白(P=0.0037)表达明显增强,而下调miR-140-5p后OPG(P=0.0047)和OCN蛋白(P=0.0049)表达减弱.结论 本研究初步证明了miR-140-5p与FGF9在拇外翻的病理过程中具有重要作用,这为拇外翻的病因以及诊治研究提供了新的方向.
关键词： 拇外翻 miR-140-5p FGF9 成骨细胞 -
FGF9转基因小鼠的功能及组织表达谱的研究
目的:研究突变FGF9转基因小鼠的功能变化,分析Fgf9及其受体Fgfr3的组织表达谱.方法:采用RT-PCR法克隆FGF9,在该基因296位引入点突变为(G→A)后插入pcDNA3.1(-)B载体,通过显微注射建立转基因小鼠;利用PCR法鉴定转革因小鼠基凶型,RT-PCR及免疫组化鉴定转基因小鼠内源性Fgf9和Fgfr3的组织表达谱.结果:建立了12个系的转基因小鼠模型,虽未检测到转入基因的表达,但检测到内源性Fgf9和Fgfr3存心、脑、肾、肌肉和骨关节等组织中的表达情况.结论:获得Fgf9和Fgfr3组织表达谱及在不同时期小鼠骨关节中的表达情况;推测转入基冈未表达与FGF9转入后被沉默或抑制有关,为此正在建立特异点突变FGF9基因敲入小鼠模型.
