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正常人黑素细胞MITF对酪氨酸酶相关蛋白的转录调控研究
目的 研究正常人黑素细胞小眼畸形相关转录因子(MITF)对与黑素生成密切相关的酪氨酸酶相关蛋白(TRPs)家族的转录调控.方法 应用小RNA干扰技术(慢病毒感染),对培养的原代正常人黑素细胞进行MITF基因沉默,然后应用实时定量PCR和免疫印迹方法,分别检测MITF基因沉默前后,MITF、酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1)和酪氨酸酶相关蛋白2(TYRP2)的基因与蛋白表达水平.结果 正常人黑素细胞具有显著表达的MITF、TYR、TYRP1和TYRP2； MITF基因沉默后,MITF、TYR和TYRP1的基因表达水平分别下降2倍(P =0.001)、1.5倍(P=0.05)和5倍(P =0.005),TYRP2的表达水平上调3倍(P =0.004)；而MITF基因沉默后的MITF、TYR、TYRP1的蛋白表达也显著下降,TYRP2蛋白显著升高.结论 黑素细胞TRPs家族与MITF转录调控密切相关,TYRP2可能存在不依赖于MITF的转录调控.
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黑线仓鼠及其白化突变系TYR、TYRP1的基因表达水平比较分析
目的 本研究旨在研究TYR、TYRP1基因在黑线仓鼠与白化突变系皮肤组织中的表达情况,探索其与白化毛色性状的产生是否具有相关性.方法 以黑线仓鼠和白化突变系皮肤组织为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术,分别得到黑线仓鼠与白化突变系TYR和TYRPI基因的相对表达量.结果 黑线仓鼠皮肤中的TYR和TYRPI基因的mRNA相对表达量分别是白化突变系皮肤组织中的2.5倍和5.3倍.结论 表明黑线仓鼠皮肤中TYR、TYRP1的基因表达水平存在表达差异,白化突变系TYR、TYRP1基因发生表达下调,揭示出了TYR、TYRP1基因的表达量与白化突变系白化性状的产生有关.
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实验兔酪氨酸酶基因家族表达水平与毛色和虹膜颜色性状的关系研究
目的 探讨家兔酪氨酸酶家族基因表达量与动物不同毛色和虹膜颜色性状与之间的关系.方法 选取白毛黑眼兔、日本大耳白兔、獭兔和青紫兰兔4个品系家兔各12只,分别取皮肤和虹膜组织提取RNA,采用荧光定量PCR和ΔΔCT方法检测其中Tyr,Tyrp1,Dct基因的相对表达量,并在品系间和组织间进行比较.结果 Tyr基因在白毛黑眼兔和青紫兰兔虹膜组织中的表达水平极显著高于该基因在日本大耳白兔和獭兔虹膜组织中的表达水平.Tyrp1基因在青紫兰兔皮肤组织中的表达水平极显著高于该基因在日本大耳白兔、獭兔和白毛黑眼兔皮肤组织中的表达水平.而Tyr基因在各品系实验兔的皮肤组织中,Tyrp1基因在各品系实验兔的虹膜组织中,以及Dct基因在各品系实验兔的皮肤和虹膜组织中虽然有一定的高低变化,但差异均未出现显著性.结论 黑毛家兔皮肤组织中Tyrp1基因平均表达水平显著高于白毛家兔.黑眼家兔虹膜组织中Tyr基因的表达水平显著高于红眼家兔.本研究揭示了家兔酪氨酸酶基因家族成员Tyrp1和Tyr的表达量分别与家兔的毛色和虹膜颜色表型具有相关性.
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单管等位基因特异性扩增法同时测定多重单核苷酸多态性
目的:建立了一种单管等位基因特异性扩增法同时测定多重单核苷酸多态性(SNP).方法:以TYP基因外显子1上的3个SNP位点(71G>A、425A>T和758G>A)为例,首先采用PCR预扩增得一段含所有待测SNP位点的长片段;然后用限制性内切酶将其消化成短片段,在连接酶的作用下与设计的DNA适配器相连;以此连接产物为模板,在单个PCR管中加入一种适配器特异性通用引物和所有等位基因特异性引物进行PCR扩增;后用琼脂糖凝胶电泳法分离检测PCR扩增产物,并根据扩增片段的大小判断SNP的类型.结果:采用该法成功测定了30名健康中国人的TYP基因中的3个SNP位点,与限制性片段长度多态性法(RFLP)测定结果完全一致.结论:该方法特异性高、结果准确、检测成本低,可用于同时测定多个SNP位点.
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逍遥散有效部位对A375与HacaT细胞共培养模型TYR及其相关蛋白mRNA表达的影响
目的:探讨逍遥散有效部位对A375与HacaT细胞共培养模型黑素合成的影响及机理.方法:制备逍遥散AB-8大孔树脂柱层析富集物,将其作用于以1∶2的比例构建的A375细胞与HacaT细胞共培养模型,采用Hunt法检测黑素含量,RT-PCR法测定TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA的表达.结果:逍遥散大孔树脂柱层析40％乙醇洗脱部位对细胞共培养模型作用显著,与阴性对照组比较,逍遥散4、2 g/L组黑素量分别下调82.23％、93.01％;TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA表达量分别下调29.11％、23.78％、20.05％和25.13％、15.02％、11.64％ (P ＜0.01).结论:逍遥散有效部位提取物可能通过下调TYR、TRP-1和TRP-2 mRNA的表达而降低人黑素瘤细胞的酪氨酸酶活性和黑素合成量.
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慢性心理应激对小鼠血清中TYR,SOD和MDA的影响
目的 通过对小鼠进行慢性心理应激实验,为进一步研究慢性心理应激对白癜风、白发等色素减退性疾病的影响及可能的机制提供参考.方法 24只C57BL/6雄性黑发鼠随机分为心理应激组(8只)、正常对照组(8只)、电击组(8只).电击组小鼠接受电击;心理应激组小鼠旁观电击组鼠遭受电击过程,通过视觉、听觉、嗅觉等产生心理应激.每天应激持续30min,连续14d.结果 心理应激组中血清酪氨酸酶(TYR)活性显著低于对照组(P＜0.05),血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量显著高于对照组(P＜ 0.05).结论 慢性心理应激可导致体内TYR活性降低,SOD活性、MDA含量增高,影响机体的色素合成功能,可能参与白瘢风、白发等色素减退性疾病的发生过程,是导致该类疾病发生的可能作用机制.
