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CCAAT/增强子结合蛋白α抑制人肝癌细胞内的肝刺激因子表达
目的 探讨CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)对人肝癌细胞内肝刺激因子(hepatic stimulator substance,HSS)表达的影响及其在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)抑制HSS表达过程中的作用.方法 采用凝胶迁移电泳实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究C/EBPα与HSS启动子的体外相互作用,real-time PCR和Western blotting的方法测定hHSS mRNA和蛋白质表达情况.结果 EMSA实验证实C/EBPα可以与hHSS启动子-343/-330区域内的C/EBPα结合位点结合,对hHSS表达具有负性调节作用,C/EBPα siRNA转染入HepG2细胞后,hHSS mRNA和蛋白质表达均升高.但C/EBPα表达下降并不影响EGF对hHSS表达,而EGF不改变C/EBPα的活性和表达.结论 C/EBPα可通过C/EBP位点抑制hHSS的表达,但不参与EGF对hHSS的转录调节过程.
关键词： 肝刺激因子 表皮生长因子 CCAAT/增强子结合蛋白α -
尼克酰胺对小鼠前脂肪细胞增殖及分化影响
目的 探讨尼克酰胺(NAM)对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响及其机制.方法 培养3T3-L1前脂肪细胞,添加NAM,观察其对细胞增殖及分化的影响,以添加白藜芦醇(Res)作阳性对照,以不添加任何药物为空白对照;用水溶性四氮唑(WST-1)法检测细胞的增殖,用染色比色法检测细胞的分化,采用蛋白免疫印记(west-ern blot)技术检测沉默信息调节因子1(Sirtl)、过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)位点的蛋白质表达.结果 干预48 h后,NAM组细胞相对数量是对照组的1.152倍,NAM+Res组是Res组的1.272倍;NAM组细胞相对脂肪是对照组的1.519倍,NAM + Res组是Res的1.321倍;添加NAM后Sirtl、PPARγ、42和24KDa的C/EBPα蛋白表达水平分别是对照组的0.381、2.107、1.005和1.233倍,NAM+Res组Sirtl、PPARγ、42 KDa和24KDa的C/EBPα表达水平分别是Res组的0.421、2.226、2.031和1.544倍.结论 NAM可增加3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化,机制可能是通过抑制Sirtl表达而增加脂肪细胞分化相关蛋白PPARy,C/EBPα的表达.
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敲减CCAAT/增强子结合蛋白α通过增加O-GlcNAc糖基化水平促进肝癌细胞体外增殖
目的 探讨CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)在肝癌细胞增殖中的作用及其机制.方法 利用靶向C/EBPα的RNAi慢病毒感染Hep3B肝癌细胞系,构建C/EBPα肝癌细胞系敲减模型.采用 qRT-PCR和Western blot分别检测C/EBPα mRNA和蛋白表达水平,采用CCK-8检测敲减C/EBPα后对Hep3B细胞增殖的影响,采用在正常高葡萄糖(NG,4.5 g/L)和低葡萄糖(LG,1 g/L)条件下培养细胞的增殖变化,采用Western blot法检测不同葡萄糖浓度条件下在C/EBPα敲减细胞和对照细胞乙酰葡糖胺转移酶(OGT)、乙酰葡糖胺水解酶(OGA)和整个O-GlcNAc糖基化水平.结果 靶向C/EBPα的RNAi慢病毒感染Hep3B肝癌细胞后,C/EBPα mRNA水平下调了(7.5±2.3)倍(P<0.05),蛋白表达水平下调了(8.8±0.25)倍(P<0.001),提示C/EBPα敲减细胞系构建成功;敲减C/EBPα后明显促进肝癌细胞的体外增殖;在低葡萄糖条件下刺激48 h和72 h,敲减C/EBPα分别促进细胞增殖15.4%(P<0.05)和25.0%(P<0.01);敲减C/EBPα后细胞OGA蛋白表达水平在正常高糖和低糖刺激24 h和48 h时分别下调了70.1%(P<0.01)、51.4%(P<0.05)和61.2%(P<0.05),整体O-GlcNAc糖基化表达水平上调,在低糖刺激48 h时升高80.6%.结论 敲减转录因子C/EBPα可以提高细胞整体O-GlcNAc糖基化水平,从而促进肝癌细胞的体外增殖.
关键词： 肝细胞癌 CCAAT/增强子结合蛋白α O-GlcNAc糖基化 体外 -
姜黄素通过减少CREB转录活性抑制前脂肪细胞分化
目的 探讨姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及其作用机制.方法 选取3T3-L1前脂肪细胞为研究对象,姜黄素(10、20、40 μmol·L-1)处理3T3-L1前脂肪细胞并同步诱导细胞分化,采用MTT法检测3T3-L1前脂肪细胞增殖情况,油红O染色方法检测胞质脂质堆积情况,实时荧光定量PCR法及蛋白印迹法检测3T3-L1脂肪细胞环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物体增殖剂活化受体γ (PPARγ)的mRNA及蛋白表达水平.结果 MTT结果显示,姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖具有明显抑制作用,且呈现一定剂量、时间依赖性;油红0染色显示,姜黄素可抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,且呈现一定剂量依赖性;0、20、40 μmol·L-1姜黄素处理3T3-L1前脂肪细胞,p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ mRNA水平及蛋白水平随姜黄素剂量升高均呈现明显下降趋势(P＜0.05).结论 姜黄素可有效抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖分化,其机制可能为姜黄素抑制CREB转录活性,从而抑制C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ表达.
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白藜芦醇对小鼠3T3-L1细胞增殖与分化的影响及其机制
目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对小鼠3T3-L1细胞增殖、分化的影响及其机制.方法 培养3T3-L1前脂肪细胞,添加不同剂量的白藜芦醇,用WST-1法检测细胞的增殖;用油红O染色后以染色比色法分析脂肪细胞的分化程度;采用Real time PCR技术检测各组脂联素和瘦素的mRNA表达;采用Western blot技术检测相关位点,包括沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,Sirt1)、过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor γ,PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(CCTTA enhancer binding protein α,C/EBPα)的蛋白质表达.结果 Res明显抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,且呈一定的时间-剂量依赖关系;与对照组比较,Res组脂联素和瘦素的mRNA表达水平下降(P<0.01),Res抑制3T3-L1前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化;添加Res导致脂肪细胞中Sirt1蛋白表达水平上升,PPARγ和C/EBPα蛋白表达水平下降.结论 白藜芦醇能抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化,其机制可能是通过增加Sirt1表达,抑制脂肪细胞分化相关蛋白PPARγ、C/EBPα的表达.
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促红细胞生成素抑制正常及缺铁性贫血大鼠铁调素的表达
目的:探讨促红细胞生成素(EPO)在缺铁性贫血(IDA)大鼠模型中对铁调素(hepcidin)表达的影响.方法:通过反复放血和饲喂低铁饲料,建立IDA大鼠动物模型,比较药物干预组(EPO)与非干预组及正常对照组与正常给药组(EPO)大鼠血清hepcidin表达的差异.Western blot检测肝脏内信号因子CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)含量.结果:IDA模型组腹腔注射EPO后,血清hepcidin和肝脏C/EBPα含量显著降低.EPO对正常大鼠hepcidin表达也有显著抑制作用(P<0.05).结论:hepcidin可能参与了IDA的发生,在正常大鼠和IDA大鼠中,EPO能通过下调C/EBPα阻碍其激活hepcidin启动子终抑制hepcidin的表达.
关键词： 促红细胞生成素 缺铁性贫血 铁调素 CCAAT/增强子结合蛋白α -
Notch1/Hes1信号调控C/EBPα表达对AECII细胞增殖与分化的影响
目的:探讨Notch1/Hes1信号通路能否通过调控CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的表达从而影响肺泡II型上皮细胞(AECII)的增殖与分化功能.方法:体外培养人AECII,将细胞随机分为对照组、激活剂组(加入Notch通路激活剂Jagged1蛋白500μg/L)和抑制剂组(加入Notch通路抑制剂DAPT 10μmol/L),于干预后24 h收获各组细胞.采用RT-qPCR和Western blot法分别检测Notch1、Hes1及C/EBPα的mRNA与蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞活力;细胞计数检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及分化.结果:与对照组相比,激活剂组Notch1、Hes1和C/EBPα的mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.05),促进AECII从S期进入G2/M期,增殖增加而分化减少(P<0.05);抑制剂组Notch1、Hes1和C/EBPαmRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),AECII被阻滞于G0/G1期,增殖减少而分化增加(P<0.05).结论:Notch1/Hes1信号可调控C/EBPα表达并能影响AECII增殖与分化.
