首页 > 文献资料
-
四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37表达细胞系的建立
目的:建立四环素调控型猪鼻支原体蛋白P37的表达细胞系,为研究p37对细胞表型的影响及相关机制奠定基础.方法:构建pcDNA5/FRT/TO-p37重组质粒,酶切鉴定后用脂质体方法将质粒与重组酶表达载体pOG44共转染Flp-In-T-REx-293细胞,用Hygromycin和Blasticidin双药筛选出阳性克隆,分别提取细胞总RNA和总蛋白,应用反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)和Western印迹对其表达进行鉴定,并确定四环素诱导的适时间和浓度.通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测P37对细胞增殖的影响.结果:转染pcDNA5/FRT/TO-p37的Flp-In-T-REx-293细胞克隆能成功表达P37蛋白(相对分子质量为43.5×103),且能将该蛋白分泌至胞外.四环素对其表达显示出明显的调控作用,不加四环素的细胞不表达P37蛋白.四环素质量浓度在2 mg/L并作用60 h其表达水平即可达到高峰.P37的表达对细胞增殖具有一定的促进作用.结论:已建立受四环素调控的P37高效表达细胞系,为进一步研究p37的功能和作用机制提供了实验细胞模型.
关键词： 四环素 支原体属 癌基因蛋白质v-mos 细胞系 -
胃腺癌组织PI3Kp85α、pAkt及Ki-67表达和意义
目的 利用组织芯片检测PI3Kp85α、pAkt、Ki-67蛋白在胃黏膜、胃腺癌及癌旁组织的表达情况,探讨其意义.方法 用免疫组化技术检测了30例胃黏膜组织、85胃腺癌组织(分为高、中、低分化3种)及其癌旁组织中PI3Kp85α、pAkt及Ki-67的表达.结果 PI3Kp85α、pAkt和Ki-67蛋白在胃黏膜、癌旁组织及胃腺癌组织中的阳性表达率差异有统计学意义(χ2=41.03～57.58,P<0.01),随病情进展三者表达逐步增强(Hc=6.86～13.30,P<0.05、0.01).在不同分化程度的胃腺癌中PI3Kp85α、pAkt和Ki-67蛋白的阳性表达率差异有显著性(χ2=18.08～18.90,P<0.01),随肿瘤恶性程度增高其阳性表达增强(Hc=15.95～20.10,P<0.01).PI3Kp85α、pAkt与Ki-67蛋白三者的表达两两相关(r=0.82、0.81、0.86,P<0.01).结论 PI3Kp85α、pAkt和Ki-67的表达与胃腺癌的发生密切相关.
关键词： 胃肿瘤 癌基因蛋白质v-mos 蛋白质pAkt Ki-67抗原 芯片分析技术
