首页 > 文献资料
-
重组凋亡相关蛋白PDCD5的纯化及稳定性
目的:建立简便、有效的原核表达促凋亡相关蛋白PDCD5的纯化路线, 获得高纯度的PDCD5蛋白,并观察其稳定性.方法:以包涵体形式表达的PDCD5融合蛋白,经包涵体洗涤、变性、复性、酶切、DEAE Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-200两步层析分离获得PDCD5蛋白.选用毛细管电泳方法检定蛋白质纯度,SDS-PAGE检定蛋白质的稳定性.结果:经毛细管电泳方法检测PDCD5蛋白纯度为100%,相对分子质量15 800,等电点5.9. 生物学活性分析PDCD5蛋白能够促进撤除细胞因子的HL-60细胞的凋亡,呈现一定的量效关系.稳定性研究发现储藏中的PDCD5蛋白不稳定,对温度敏感,4 ℃和25 ℃极易降解,而-20 ℃和冻干保存则相对稳定.结论:本研究建立的蛋白纯化方法可以获得大量、高纯度PDCD5蛋白.稳定性实验提示PDCD5宜在-20 ℃以下或冻干保存.
关键词： PDCD5 重组蛋白质类/分离和提纯 凋亡 HL-60细胞 -
Triton X－114用于去除内毒素的研究
目的：探讨规模化生产原核表达重组蛋白的Triton X－114去除细菌内毒素的方法与效果。方法以大肠杆菌表达的重组人干扰素α2b、重组人生长激素、重组葡激酶蛋白粗提液为原料，采用反复抽提相分离法，研究Triton X－114去除细菌内毒素的效果。结果经一次Triton X－114抽提，能够去除蛋白粗提液中95％的细菌内毒素，蛋白收率保持85％以上，蛋白性质不受影响。结论 Triton X－114反复抽提相分离法能够有效地去除细菌内毒素，适合于规模化原核重组蛋白的生产。
关键词： 洗涤剂 内毒素类 重组蛋白质类/分离和提纯 -
重组蛋白MSH-Ang的构建表达和纯化分析
目的对重组蛋白促黑激素-血管生成素(Melanocyte stimulating hormone-Angiogenin,MSH-Ang)的表达条件、发酵条件和纯化方法进行研究.方法通过化学方法偶联或基因融合表达的方法将靶向物质与毒性分子的蛋白连接起来制备融合蛋白.结果重组蛋白MSH-Ang在表达菌BL21(DE3)中以可溶的形式存在,需要诱导表达条件.结论经过层析和纯化可以提高表达率.
关键词： 重组蛋白质类/分离和提纯 MSH Ang 基因工程
