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RP-HPLC紫外、荧光检测法测定虎杖中白藜芦醇及其苷含量的比较研究
目的:比较虎杖药材中白藜芦醇及其苷的两种含量测定方法.方法:采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)串联紫外-荧光检测器法同时测定虎杖乙醇提取物中白藜芦醇及其苷的含量.C18色谱柱,乙腈-水为流动相,紫外检测波长λ=290 nm,荧光波长λEx/λEm=334/404.结果:两种方法线性范围、回收率、精密度等试验的比较结果基本一致,但荧光检测法灵敏度相对较高.结论:两种检测方法均能准确测定虎杖中白藜芦醇及其苷的含量.
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白藜芦醇苷的抗癌作用及对癌细胞周期的影响
目的:探讨蓼科植物虎杖中提取的白藜芦醇苷的抗癌作用及对细胞周期的影响.方法:采用小鼠移植性肿瘤为动物肿瘤模型,观察给药后小鼠肿瘤生长情况,以对肿瘤的百分抑制率为判断抗癌作用指标;同时对癌细胞进行流式细胞仪(FCM)分析.结果:当剂量为1、2、4mg/kg时,对小鼠Heps和EAC的抑制率分别为21.74%、45.41%、48.31%和37.58%、38.26%、44.97%,对癌细胞增殖周期的影响能使癌细胞GO-1期细胞减少,S期细胞不明显,G2-M细胞增加.结论:白藜芦醇苷对小鼠移植性肿瘤具有明显抑制作用,并能使癌细胞增殖周期的细胞趋于同步化,有利于化疗药物选择和合并使用.
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虎杖中白藜芦醇、白藜芦醇苷提取工艺的研究
目的 考察虎杖药材中白藜芦醇、白藜芦醇苷的佳提取工艺.方法 采用HPLC法,以白藜芦醇、白藜芦醇苷为指标,通过单因素实验及正交试验确定从虎杖中提取白藜芦醇、白藜芦醇苷的佳工艺.结果 虎杖药材的佳提取工艺为:70％乙醇25倍量,加热时间为120min,辅助超声25 min.结论 该实验确定的佳提取工艺稳定性好且简便易行.
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白藜芦醇及其糖苷白藜芦醇苷与药物外排转运体的相互作用研究
目的:通过多种不同细胞模型研究两种芪类天然化合物白藜芦醇(trans-resveratrol, TR)及白藜芦醇苷(trans-piceid, TP)与多种药物外排转运体间的相互作用.方法:高效液相及荧光分光光度法分别测定细胞内TR、TP及罗丹明 123的浓度,MTT比色法测定细胞活性,Western blot法测定P-糖蛋白的表达.结果 :P-糖蛋白抑制剂及底物(维拉帕米和罗丹明123)对TR及TP的细胞摄取无影响. 多药耐药相关蛋白2抑制剂,丙磺舒可将TR及TP的细胞摄取量分别增加 1.3 倍和 1.6 倍.TR及TP能够显著性增加大鼠脑微血管细胞对罗丹明123的摄取及阿霉素在人白血病阿霉素耐药细胞上的毒性,但对人白血病阿霉素耐药细胞上P-糖蛋白的表达没有显著性改变 .米托蒽醌在人非小细胞肺癌细胞上的毒性作用不受TR及TP的影响.结论: TR及TP可以抑制P-糖蛋白的外排作用,但其本身不被P-糖蛋白外排,而是被多药耐药相关蛋白2外排.TR及TP对人乳腺癌多药耐药蛋白的外排作用没有影响.
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白藜芦醇苷对羟自由基所致大鼠脑线粒体氧化损伤的保护作用
目的研究白藜芦醇苷对氧自由基所致大鼠脑线粒体损伤的保护作用,探讨白藜芦醇苷治疗心脑血管疾病的机制.方法利用Fe2++VitC系统产生*OH,诱导大鼠脑线粒体损伤;测定线粒体肿胀度、膜流动性、膜磷脂含量以显示线粒体膜功能,测定ATPase,细胞色素C氧化酶活性以显示线粒体能量代谢能力,测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以显示线粒体抗氧化能力.结果 *OH造成线粒体显著损伤,白藜芦醇苷(终浓度100、200、400 mg*L-1)明显抑制膜磷脂降解、线粒体肿胀,增加膜流动性,改善线粒体能量代谢状态,增强抗氧化能力.结论白藜芦醇苷对氧自由基所致大鼠脑线粒体损伤有明显保护作用,其机制与清除自由基、抑制脂质过氧化有关.
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白藜芦醇苷对大鼠心室肌细胞L-型钙电流的抑制作用
研究表明,白藜芦醇苷(Polydatin)可对抗大鼠心肌缺血/再灌所致心脏功能损伤和细胞凋亡,以及抗心律失常[1].其心脏保护作用与心肌细胞ATP敏感钾通道开放、Bcl-2蛋白表达增加和Bax蛋白表达减少、NO含量增加有关[2-3].我们近来的电生理学研究显示,Polydatin可缩短大鼠乳头肌动作电位复极化过程,并可抑制部分去极化乳头肌动作电位,其作用与心肌细胞ATP敏感钾通道激活和L型钙通道抑制有关[4].本研究旨在应用全细胞膜片钳方法探讨Polydatin对大鼠心室肌细胞L型Ca2+电流(ICa-L)及其通道动力学的影响.
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白藜芦醇苷对慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺内突变型p53基因表达的影响
目的研究白藜芦醇苷(PD)对慢性低氧性肺动脉高压(CHPH)大鼠肺内突变型p53基因表达的影响.方法将SD大鼠随机分为对照组、低氧组和低氧+PD治疗组.观察PD对CHPH大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室肥厚指数[右室/左室+室间隔(R/L+S)]、肺血管形态学指标、突变型p53基因表达的影响.结果21d后,低氧组mPAP、R/(L+S)、肺血管管壁面积占血管总面积的百分比、管壁厚度占血管外径的百分比及突变型p53基因表达明显升高,肺血管管腔面积占血管总面积的百分比明显降低;低氧+PD组上述变化得到抑制或减轻.结论PD可有效降低肺动脉压,延缓大鼠CHPH进程,其机理可能与抑制突变型p53基因表达及细胞增殖,从而有效抑制肺血管重建有关.
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不同采收时间虎杖药材中白藜芦醇苷含量差异研究
目的:研究不同采收时间虎杖药材中白藜芦醇苷的含量差异,以指导药材佳采收时间.方法:以C18化学键合硅胶柱为固定相,乙腈-水(20:80)为流动相,检测波长为303 nm,流速1 ml/min.结果:不同时间采收的虎杖药材中白藜芦醇苷的含量差异较大.以夏季为高,冬季为低.结论:虎杖药材适宜采收时间为5～9月.
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虎杖中白藜芦醇苷提取分离工艺研究
目的:考察虎杖中白藜芦醇苷的佳提取分离工艺.方法:采用正交设计实验优选提取分离条件,双波长薄层扫描测定含量.结果:醇提工艺的优条件为:95%乙醇15倍量,回流提取3次,2 h/次;水提工艺的优条件为:水10倍量,回流提取3次,2 h/次,两工艺的关键步骤为乙醇浓度和回流时间.结论:该实验确定的佳提取工艺稳定性好且简便易行.
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白藜芦醇苷对急性心肌梗死模型犬的影响
目的观察白藜芦醇苷注射液对急性心肌梗死模型犬的影响.方法将犬麻醉后,采用冠状动脉左前降支结扎造成心肌梗死模型,分别给予白藜芦醇苷注射液2.5,5.0,10.0 mg·kg-1,测定犬心肌梗死范围并检测犬血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活性. 结果白藜芦醇苷静脉注射可显著降低心肌梗死模型犬心肌缺血的程度,缩小心肌缺血的范围;显著减小梗死范围,降低血清LDH、CK升高的程度;减轻心肌缺血时的细胞损害.结论白藜芦醇苷注射液对急性心肌梗死模型犬心肌细胞有明显的保护作用.
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不同产地虎杖中白藜芦醇与白藜芦醇苷含量测定
目的 建立测定广西不同产地虎杖药材中白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法.方法 色谱柱:迪马C18(4.6 mm×250 mm,5μm)；流动相A:乙腈；流动相B:0.3％磷酸；梯度洗脱(15％～ 40％A,0～25 min)；检测波长:254 nm;柱温:25℃:流速:1.0mL·min-1.结果 测得广西产虎杖药材中自藜芦醇和白藜芦醇苷高含量分别为1.998 3％和2.776 1％,低含量分别为0.356 1％和0.370 5％.结论 所建立的方法简便可靠,快速,重复性好,结果稳定,便于对虎杖药材进行质量控制.不同产地虎杖药材中白藜芦醇和白藜芦醇苷含量差异明显.
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白藜芦醇与白藜芦醇苷抗氧化活性比较
目的:比较白藜芦醇与白藜芦醇苷清除自由基的能力以及对H2O2造成人脐静脉血管内皮细胞ECV304损伤的保护作用.方法:以邻二氮菲-Fe2+体系产生羟基自由基(·OH)的方法研究白藜芦醇与白藜芦醇苷清除自由基的能力;采用H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)氧化损伤模型,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测两种药物对H2O2致氧化损伤细胞的保护作用.结果:白藜芦醇与白藜芦醇苷清除·OH的能力呈剂量依赖性,其中白藜芦醇苷的作用比白藜芦醇强,但均弱于维生素C;白藜芦醇对H2O2致氧化损伤的ECV304细胞的保护作用强于白藜芦醇苷.结论:白藜芦醇对H2O2损伤的ECV304细胞具有明显的保护作用.
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高效液相色谱法测定虎梅含片中白藜芦醇苷的含量
目的:采用高效液相色谱法(HPLC)测定虎梅含片中白藜芦醇苷的含量,以控制该制剂的质量.方法:采用Shimpack CLC-ODS柱,以乙腈-水(18:82)为流动相,检测波长为303mm,流速为1.0 mL·min-1.结果:白藜芦醇苷进样量线性范围为36.04～360.04 ng,r=0.999 9;平均回收率为98.2%,RSD为1.4%.结论:该方法简便、快速、准确.
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高效液相色谱荧光光谱法测定虎杖中的白藜芦醇及白藜芦醇苷含量
目的:建立高效液相色谱(HPLC)法,分离和测定虎杖中的白藜芦醇的含量.方法:采用NUCLEODUR 100-5 C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:异丙醇和水二元梯度洗脱系统;流速:0.6 mL·min-1;荧光检测器:激发波长:334 nm;发射波长:404 nm.结果:在选定色谱条件下其白藜芦醇苷和白藜芦醇的线性范围良好,样品加样回收率在96.5%～101.4%,相对标准偏差在0.75%～1.42%.结论:本方法精密度好,结果可靠,适合虎杖中白藜芦苷和白藜芦醇的定量分析.
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均匀设计法优选虎杖提取工艺
目的:筛选虎杖提取工艺,为益脑脉制剂工艺改革提供依据.方法:以虎杖中主要有效成分大黄素,白藜芦醇,白藜芦醇苷以及浸膏得率为指标,以均匀设计实验考察了乙醇浓度、溶媒量、提取时间、提取次数等对效果的影响.结果:60%乙醇、14倍量提取1.5 h,提取液中3种有效成分含量均较高,浸膏得率较低.结论:简单易行,适合工业化生产.
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高效液相色谱法测定虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量
目的 测定虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量.方法 采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Lichrospher Cl8,流动相为乙腈-0.03％磷酸水溶液(30:70),梯度洗脱,流速:1.0 mL/min,柱温:30℃,检测波长:306nm进样量20mL.结果 白藜芦醇的回归方程为:Y=83.7120X+ 2501.7909,r=0.8351.白藜芦醇在41.8-10.22×103 μg含量范围内线性关系良好；白藜芦醇苷的回归方程为:Y=89.5637X+ 1045.3914,r=0.8324.白藜芦醇苷在109.056-4260μg含量范围内线性关系良好.结论 该法准确、简便、重现性好,适用于虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的定量分析.
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正交法优化虎杖中白藜芦醇苷提取工艺的研究
目的考察虎杖白藜芦醇苷的佳提取分离工艺.方法采用正交实验优选提取分离条件,HPLC测定含量,丙酮重结晶纯化.结果醇提工艺的优条件为:70%乙醇12倍量,回流提取3次,2h/次.结论该实验确定的佳提取工艺稳定性好且简便易行.
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高效液相色谱检测转基因生菜中白藜芦醇和白藜芦醇苷的研究
目的 建立快速检测转基因生菜中白藜芦醇和白藜芦醇苷的高效液相色谱法. 方法 采用Agilent-ZORBAXSB-C18 5 μm 4.6×250 mm色谱柱,流动相为乙腈-水(45+55),流速1.0 ml/min,波长303 nm. 结果 线性关系良好,白藜芦醇r=0.9999,回收率86.0%～97.8%,变异系数6.6%,低检出量0.0113 μg;白藜芦醇苷r=0.9991,回收率81.6%～95.6%,变异系数7.0%,低检出量0.0159 μg. 结论 以高效液相色谱检测转基因生菜中白藜芦醇和白藜芦醇苷,操作办便、快速、准确度高.
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白藜芦醇苷对大鼠睾丸扭转缺血和再灌注损伤的保护作用
目的 探讨白藜芦醇苷对大鼠睾丸扭转的保护作用.方法 选取4周龄雄性SD大鼠36只,随机分为3组:假手术组(A组)、扭转复位组(B组)、扭转复位+白藜芦醇苷组(C组).B组和C组大鼠建立睾丸扭转复位模型,A组不扭转.扭转4h后复位睾丸,复位前15 min B组腹腔注射生理盐水1 ml;C组腹腔注射白藜芦醇苷1 ml(5.0 mg/kg).复位后4h处死所有动物取睾丸待测.以原位缺口末端标记法(TUNEL)检测生精细胞凋亡指数;化学比色法测定睾丸组织中总抗氧化能力(T-AOC)活性,羟胺法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,TBA法测定丙二醛(MDA)含量;精密称重睾丸后睾丸组织HE染色观察组织形态变化.结果 B组T-AOC[(20.31± 2.55) U/mg]、SOD[(72.76±5.58) U/mg]比A组[(33.62±3.29) U/mg]、[(165.33±5.42) U/mg]明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而C组T-AOC[(30.05±2.08) U/rng]、SOD[(103.15±14.16)U/mg]较B组明显升高(P＜0.05).B组MDA[(42.38±8.94) U/mg]比A组[(11.51±1.89) U/mg]明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),而C组[(23.87±4.47) U/mg]较B组明显减低(P＜0.05);C组凋亡指数[(12.2±1.34)％]较B组显著下降(P＜0.05);B组睾丸扭转复位后损伤的组织学改变较A组损伤明显;生精小管变薄,细胞脱落坏死.C组的组织学改变较B组明显改善;生精小管变薄减少,细胞脱落坏死减少.结论 白藜芦醇苷具有明显对抗睾丸扭转复位后的氧化损伤,对因睾丸扭转导致的缺血再灌注损伤具有保护作用.
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紫金前列康胶囊指标成分含量测定的实验研究
为了有效控制紫金前列康胶囊制剂的质量,采用高效液相色谱法建立了本制剂指标成分白藜芦醇苷含量测定方法,平均加样回收率为96.86%(IRSD:1.95%).结果表明该方法可行,为制定紫金前列康可控质量标准提供了实验依据.
