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紫杉烷类药物对SD大鼠CYP3A1作用效应的研究
目的 研究紫杉烷类抗癌药紫杉醇和多西紫杉醇对Sprague-Dawley(SD)大鼠肝细胞CYP3A1活性的作用.方法 本实验将15只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(尾静脉注射给予生理盐水,每只1 mL,每日1次,连续3 d),地塞米松诱导组(灌胃给予地塞米松,100 mg·kg-1·d-1,连续3 d)、酮康唑抑制组(腹腔注射给予酮康唑,50 mg·kg-1·d-1,连续3 d)、紫杉醇实验组(尾静脉注射给予紫杉醇,6.7 mg·kg-1·d-1,连续3 d)、多西紫杉醇实验组(尾静脉注射给予多西紫杉醇,30mg·kg-1·d-1,连续3 d).采用HPLC检测以睾酮为探针药物经大鼠肝微粒体温孵后转化的代谢产物6 β-羟基睾酮的生成速率以评价各组间CYP3A1酶的活性.结果 空白对照组、地塞米松诱导组、酮康唑抑制组、紫杉醇实验组、多西紫杉醇实验组6 β-羟基睾酮的生成速率分别为(643.1±6.0),(2 671.1±225.7),(78.3±4.8),(724.8±36.6)和(489.3±70.6)pmol·mg(pro)-1min-1;数据经SPSS16.0统计软件分析,表明紫杉醇纽和多西紫杉醇组6 β-羟基睾酮的生成速率与地塞米松诱导组、酮康唑抑制组的差异均有极显著性(P<0.01),与生理盐水空白对照组的差异均无显著性(P>0.05).结论 紫杉醇和多西紫杉醇对大鼠肝细胞CYP3A1酶活性无诱导或抑制作用.
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HPLC法测定人肝微粒体6β-羟基睾酮和1-羟基咪达唑仑浓度
目的 建立和验证人肝微粒体中CYP3A4探药代谢物6β-羟基睾酮和1-羟基咪达唑仑的测定方法,以准确体外评价CYP3A4的活性.方法 在人肝微粒体温孵系统中加入睾酮37℃温孵生成6β-羟基睾酮,经过碱化后用乙酸乙酯提取微粒体样本,采用Phenomenex Gemina C18分离,流动相由甲醇和水组成,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长245 nm,测定微粒体中6β-羟基睾酮浓度;或人肝微粒体温孵系统中加入咪达唑仑,37℃温孵生成1-羟基咪达唑仑,经过乙腈处理人肝微粒体样本,采用Diamosil C18分离,20 mmoL·L-1醋酸铵-乙腈(60:40,V/V)流动相等度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长254 nm,测定1-羟基咪达唑仑浓度.结果 6β-羟基睾酮线性范围为0.111～8.90 mg·L～1,1-羟基咪达唑仑线性范围为20～1 000mg·L-1,两代谢物的批内、批间差异<15%,准确度为85%～115%.结论 建立的测定微粒体中6β-羟基睾酮和1-羟基咪达唑仑浓度的方法符合生物样品测定的要求,能准确测定微粒体中目标物浓度,可用于评价CYp3A4的活性.
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以睾酮为探针测定大鼠CYP3A酶活性的实验研究
目的 建立一种简便、快速、可靠的以睾酮作为探针药物,评价大鼠CYP3A酶活性的高效液相色谱检测方法 .方法 色谱柱为Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),柱温为25 ℃,检测波长为254 nm,内标为氢化可的松,流动相为甲醇-10 mmol*L-1 Na2HPO4水溶液(pH 8.25)(55∶45),流速为1 mL*min-1.睾酮以大鼠肝微粒体温孵后,用乙酸乙酯萃取,离心取上清液挥干后用甲醇-水(1∶1)复溶进样分析.结果 睾酮和氢化可的松的保留时间分别为17.74 min和6.05 min;睾酮的孵育产物6β-羟基睾酮的保留时间为4.72 min,回归方程为Y＝0.075 6X-0.021 4(r＝0.998 0),线性范围为0.312 5～20 μg*mL-1,检测限下限质量浓度为(0.078±0.016)μg*mL-1(S/N≥3),提取回收率为79.3%～95.1%,方法 回收率为98.0%～104.0%,低、中、高三个浓度日内、日间RSD均小于10.4%;温孵体系中其他内源性物质不干扰测定.结论 所建立的HPLC稳定、高效,适合睾酮及其代谢产物6β-羟基睾酮的测定,可应用于药物对大鼠CYP3A酶活性的评价.
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紫杉醇对大鼠肝微粒体CYP3A1的作用
目的:考察紫杉醇对Sprague-Dawley(SD)大鼠肝微粒体细胞色素P450 3A1(CYP3A1)酶活性的影响效应.为该药临床应用中可能与其他药物产生的相互作用提供依据.方法:将9只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(尾静脉注射给予生理盐水,每只1 mL,qd,连续3 d)、地塞米松诱导组(灌胃给予地塞米松,100 mg·kg-1·d1,连续3 d)、紫杉醇实验组(尾静脉注射给予紫杉醇,6.7 mg·kg-1·d-1,连续3 d).采用HPLC法检测以睾酮为探针药物经大鼠肝微粒体温孵后转化的代谢产物6β-羟基睾酮的生成速率来反映大鼠CYP3A1酶的活性.结果:空白对照组、地塞米松诱导组和紫杉醇组6β-羟基睾酮的生成速率分别为(643.1±6.0),(2 671.1±225.7),(724.8±36.6)pmol·(mg protein)-1·min-1.紫杉醇组6β-羟基睾酮的生成速率与地塞米松诱导组相比差异有极显著性(P＜0.01),与空白对照组相比差异无显著性(P＞0.05).结论:紫杉醇对大鼠CYP3A1酶的活性无诱导作用.
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升板方对SD大鼠CYP3A1酶活性的影响
目的:研究升板方对于SD大鼠肝微粒体CYP3A1酶活性的影响,为临床化疗联合用药方案提供参考.方法:将25只SD雄性大鼠随机分为升板方高(8.645 g/kg)、中(4.322g/kg)、低(2.161 g/kg)地塞米松诱导组(灌胃100 mg/kg,1次/d,连续3 d),及空白对照组(灌胃给予生理盐水,10mL/kg,2次/d,连续14 d).升板方各剂量组均灌胃给药,2次/d,连续14 d.以睾酮为底物探针,建立稳定、可靠的检测大鼠CYP3A1酶代谢活性的HPLC方法,考察体外代谢体系佳的孵育时间、佳蛋白浓度、佳底物浓度,在佳孵育条件下根据大鼠肝微粒体转化生成6β-羟基睾酮的速率,评价各组大鼠肝药酶的活性.结果:在大鼠肝微粒体孵育体系,睾酮代谢为6β羟基睾酮反应的佳孵育时间是10 min,佳酶蛋白浓度是0.25 mg/mL,佳底物浓度为200μmol/L.在佳孵育条件下,升板方高、中、低剂量组及空白对照组、地塞米松诱导组6β-羟基睾酮生成速率分别是:(55.82±5.97)、(65.10±6.83)、(60.89±6.53)、(62.17 ±6.55)、(126.73±15.40)μmol/(L·mg pro·min).经统计学检验,升板方高中低剂量组与地塞米松组反应速率的差异有统计学意义(P＜0.05),与生理盐水组无统计学差异.而升板方各剂量组间均无统计学差异.结论:升板方对大鼠肝药酶CYP3A1酶活性无诱导作用.
