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miRNA-204靶向Bcl-2诱导胰岛β细胞凋亡
目的 探讨过表达微小RNA-204(miR-204)靶向Bcl-2诱导胰岛β细胞凋亡的作用机制.方法 小鼠胰岛瘤细胞MIN6用含β-巯基乙醇的DMEM高糖培养基培养,采用脂质体Lipofectamine 2000转染miR-204化学合成过表达物和(或)Bcl-2过表达质粒,制备成miR-204(+)组和miR-204(+)+Bcl-2(+)组.转染48 h后,MTT法检测细胞存活;Hoechst33258染色检测细胞凋亡;ELISA法测定胰岛素分泌;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-204含量及Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶3 mRNA表达水平;Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和活化的胱天蛋白酶3表达水平.结果 MTT结果显示,miR-204(+)组细胞存活率显著低于正常对照组(P<0.01),而miR-204(+)+Bcl-2(+)组相较于miR-204(+)组细胞存活率显著升高(P<0.05);Hoechst33258染色结果显示,miR-204(+)组出现大量细胞凋亡,miR-204(+)+Bcl-2(+)组细胞凋亡率有所下降;胰岛素分泌结果显示,高糖(葡萄糖30 mmol·L-1)刺激下的miR-204(+)组细胞胰岛素分泌显著低于高糖刺激下的正常对照组(P<0.01)和miR-204(+)+Bcl-2(+)组(P<0.01);qPCR结果显示,miR-204(+)组miR-204水平显著高于正常对照组(P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达水平显著低于正常对照组(P<0.01)和miR-204(+)+Bcl-2(+)组(P<0.01),各组Bax和胱天蛋白酶3 mRNA水平无显著变化;Western蛋白质印迹检测结果显示,miR-204(+)组Bcl-2蛋白表达水平显著低于miR-204(+)+Bcl-2(+)组(P<0.05)和正常对照组(P<0.01),而Bax和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达水平显著高于其他两组(P<0.01).结论 过表达miR-204可能通过靶向Bcl-2促进胰岛β细胞凋亡.
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MicroRNA-204对胶质瘤细胞U251自噬的影响
目的 探讨microRNA-204(miR-204)对胶质瘤细胞U251自噬的影响. 方法 采用体外瞬时转染的方法抑制U251细胞中miR-204,MTT方法检测细胞的增殖情况,免疫荧光检测细胞自噬, Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1和Bcl-2的表达情况. 结果 MTT结果显示抑制miR-204明显增加U251细胞的增殖,免疫荧光结果显示抑制miR-204能够减少U251细胞的自噬, Western blot结果显示抑制miR-204能够减少U251细胞内LC3-Ⅱ和Beclin1的表达量,然而Bcl-2的表达却明显增加. 结论 miR-204可能通过上调Bcl-2的表达抑制自噬促进胶质瘤生长,提示miR-204可能成为脑胶质瘤潜在治疗靶点.
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卵巢癌组织中 miRNA-204表达变化及其对细胞株 SKOV3凋亡的影响
目的：观察卵巢癌组织中微小RNA-204（miR-204）表达变化，以及miR-204对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法选择卵巢癌患者50例，分别取其卵巢癌及相应癌旁组织；体外培养卵巢癌SKOV3细胞，随机分为1、2、3组，分别加入转染试剂、阴性对照载体、化学合成的双链miRNA-204表达载体；采用实时荧光定量PCR（ qRT-PCR）法检测组织及细胞中miRNA-204相对表达量；观察miRNA表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系；采用流式细胞仪检测卵巢癌SKOV3细胞凋亡情况。结果卵巢癌组织中miR-204 mRNA相对表达量低于癌旁组织（ P＜0．01）；miR-204 mRNA表达与FIGO分期、淋巴结转移、CA125水平相关（P均＜0．05）。1、2、3组miRNA-204 mRNA相对表达量分别为2．35±0．67、2．01±0．45、5．32±0．88，3组较1、2组增加（P均＜0．05）；细胞凋亡率分别为7．32％±1．40％、5．14％±1．90％、52．4％±9．10％，3组较1、2组增加（ P均＜0．05）。结论卵巢癌组织中miR-NA-204表达下调，且与病情进展相关；miRNA-204促进卵巢癌细胞凋亡，这可能是其发挥抑癌作用的机制之一。
关键词： 卵巢肿瘤 卵巢癌 卵巢癌SKOV3细胞株 微小RNA-204 细胞凋亡 -
微小RNA-204靶向抑制B淋巴细胞瘤-2影响非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡和迁移能力
目的 探讨微小RNA-204(miR-204)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响和对B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)的靶向作用机制.方法 以45例非小细胞肺癌组织、A549细胞株为研究对象,通过实时定量聚合酶链反应检测miR-204在NSCLC中的表达;转染miR-204模拟物和抑制剂,用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell、划痕实验、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3活性检测细胞增殖、迁移、凋亡能力变化;构建含有bcl-2 3'-非编码区野生型和突变型的双荧光素酶报告载体,并通过功能恢复实验,验证miR-204与bcl-2的靶向关系.结果 miR-204在非小细胞肺癌组织中的表达(1.28±0.31)较对照正常组织(3.75±0.27)明显降低(P=0.000),bcl-2在癌组织中表达明显增高(3.46 ±0.40比0.78±0.48,P=0.000),与TNM分期呈显著负相关,与年龄、性别关系差异无统计学意义;miR-204能明显抑制A549细胞的增殖、迁移,并促进细胞凋亡能力(P=0.000).共转染miR-204和bcl-2野生型3'非编码区双荧光素酶表达载体的A549细胞荧光活性为0.12±0.02,较对照组(0.29±0.03)显著下降(P=0.000),miR-204对细胞的增殖、凋亡、迁移能力的影响可以被过表达bcl-2所恢复.结论 miR-204在非小细胞肺癌中表达下调,可能通过靶向调控bcl-2的表达影响非小细胞肺癌的增殖、迁移、凋亡能力.
