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聚乙二醇和核酸适配体AS1411修饰的金纳米粒子对人宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响
目的 研究聚乙二醇(PEG)和核酸适配体AS1411修饰的金纳米粒子(AuNPs)对人宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性的影响.方法 用PEG和PEG-AS1411分别修饰经柠檬酸钠还原法制备的AuNPs,制备纳米粒子AuNPs@PEG和AuNPs@PEG-AS1411.分别用CCK-8法和克隆形成法检测纳米粒子的细胞毒性.用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)检测HeLa细胞对纳米粒子的吸收量.用克隆形成法检测纳米粒子联合X射线照射对HeLa细胞存活率的影响.结果 CCK-8实验结果显示,AuNPs@PEG和AuNPs@PEG-AS1411对HeLa细胞的毒性很小(P＞0.05),而克隆形成实验结果则显示,10d后HeLa细胞的存活率明显降低(t=4.38～11.60,P＜0.05).用AS1411修饰AuNPs,可以增加细胞对AuNPs的吸收.AuNPs@PEG和AuNPs@PEG-AS1411对HeLa细胞均具有辐射增敏作用(F =7.90、48.23,P＜0.05),Au浓度为10 mg/L时,其增敏比分别为1.12和1.20.结论 AuNPs@PEG和AuNPs@PEG-AS1411对HeLa细胞的急性细胞毒性较小,但具有长期毒性.用AS1411修饰PEG化的AuNPs,可以增强AuNPs的放射增敏作用.
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AS1411介导STAT3反义寡核苷酸靶向抗肿瘤的作用
目的 研究核仁素核酸适配体(AS1411)介导信号转导与转录激活因子3(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)靶向抗肿瘤的作用.方法 以RNA为耦联分子,连接靶向分子AS1411和效应分子ASO.以RNA Structure软件对预合成的不同RNA碱基耦联构建的嵌合体分子二级结构进行预测分析.以琼脂糖凝胶电泳检测嵌合体分子在血清及细胞裂解液中的稳定性.通过流式细胞术和荧光共聚焦实验检测AS1411介导STAT3 ASO进入肿瘤细胞的情况.通过CCK-8试剂盒检测STAT3 ASO对肿瘤细胞生长的抑制情况.通过RT-PCR和Western blot分析ASO对肿瘤生长相关基因表达的影响.结果 AS1411可介导STAT3 ASO高效进入肿瘤细胞,抑制C-myc、Cyclin D1、Bcl-xl和PD-L1基因的转录和翻译,并能抑制Du145细胞的生长.结论 AS1411可介导STAT3 ASO靶向进入肿瘤细胞,从而发挥抗肿瘤的作用.
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携带适配体AS1411的液态内核纳米超声造影剂的制备和评估
目的:探讨制备核酸适配体AS411靶向液态内核的纳米超声造影剂的方法,评价该靶向纳米超声造影剂体外显影能力和寻靶能力.方法:将自合成的膜材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物-聚乙二醇(PLGA-PEG-COOH)和全氟辛溴烷(perfluoroctylbromide,PFOB),采用乳化溶剂挥发法,制备液态内核的纳米颗粒(nanoparticles,NP).然后用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)催化法将AS1411连接到NP表面,制成靶向液态内核的纳米颗粒(NP-AS1411).用透射电镜检查NP-AS 1411的形态.比较NP-AS1411和NP的大小、表面电荷、包封率、生物相容性、体外显影能力和稳定性.用凝胶电泳检查AS1411是否连于NP表面.用荧光显微镜和流式细胞仪检测NP-AS1411的靶向能力.结果:NP-AS1411在电镜下呈壳-核结构,直径为(245.4±16.5) nm,大于NP的直径(P=0.05).NP-AS1411和NP在表面电荷和包封率上差异无统计学意义(P＞0.05).高浓度(25.0mg/mL)NP-AS1411与MCF-7细胞孵育24h后,细胞的活力(89％)和对照组相比明显下降(P=0.04).NP-AS1411体外相对灰阶值为86.1+6.7,明显高于脱气去离子水(P＜0.05),与和NP的体外相对灰阶值相当(P＞0.05).常温保存24h后,NP-AS1411的相对灰阶值为80.1±9.2,与24 h前相比差异无统计学意义(P＞0.05).NP-AS 1411的大小在放置24 h后也无明显变化(P＞0.05).凝胶电泳证实当NP和AS1411的摩尔比为40∶1时,连接到NP的AS1411多.MCF-7细胞分别与载有荧光香豆素6的NP-AS1411,NP孵育后,NP-AS1411在荧光显微镜下能够产生更强的绿色荧光.流式细胞仪证实NP和NP-AS1411与MCF-7细胞均有结合,但是NP-AS1411和MCF-7细胞结合后产生的荧光更强烈.结论:采用乳化溶剂挥发法和EDC/NHS催化法可以成功制备适配体靶向液态内核纳米超声造影剂.该靶向液态内核纳米超声造影剂的体外显影能力好,也同时具有良好的稳定性和特异性.
