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星形胶质细胞液压冲击损伤后蛋白质组学研究
目的 探讨星形胶质细胞在液压冲击损伤后蛋白谱变化.方法 原代培养SD大鼠脑皮质星形胶质细胞,随机分为对照组和损伤组,损伤组给予液压冲击损伤.采用比较蛋白质组学方法,分析2者之间的差异蛋白质表达谱.结果 胶质纤维酸件蛋白(GFAP)免疫组化染色鉴定,原代培养的星形胶质细胞纯度可达95%以上.液压冲击损伤使旱形胶质细胞蛋白质谱表达发生了显著改变,共发现20个蛋白质点的表达发生改变,13个蛋白质得到质谱鉴定,其中表达上调的11个,分别为肌动蛋白结合蛋白、破解蛋白、磷酸甘油酸变位酶、NADH脱氧酶10亚基、膜联蛋白1、甘油醛-3-磷酸脱氢酶,热休克蛋白27 ku、3-磷酸甘油酸脱氢酶、超氧化物歧化酶[Cu-Zn]、不均一核糖核蛋白、抗氧化蛋白2;表达下降的2个,分别为磷脂酰乙醇胺结合蛋白、ATP合酶D链.结论 本研究发现的差异蛋白质与星形胶质细胞许多重要的细胞生理活动和功能有密切关系,包括糖代谢与能量产生、抗氧化损伤、细胞骨架重排、信号转导等,可能与损伤后星形胶质细胞发生应激有关.
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体外培养大鼠星形胶质细胞液压冲击损伤的研究
目的:研究大鼠星形胶质细胞液压冲击损伤后形态学及蛋白质组学表达变化.方法:建立体外培养星形胶质细胞液压冲击损伤模型.原代培养SD大鼠脑皮质星形胶质细胞,随机分为损伤组与对照组,时照组给予(0.2±0.01)Mpa液压冲击损伤,损伤后不同时间点观察细胞形态学变化;双向凝胶电泳技术分析液压冲击损伤后蛋白质组学表达变化.结果:星形胶质细胞在液压冲击损伤后发生了显著的形态学改变,损伤后2h星形胶质细胞出现了细胞水肿、细胞皱缩、细胞连接断开和坏死,损伤后24 h、48 h细胞胞体肥大、突起增粗明显,部分区域细胞反应性增生明显.液压冲击损伤后,星形胶质细胞蛋白质表达谱发生了显著改变,损伤后有13个蛋白点表达发生显著改变,其中5种蛋白得到质谱鉴定,分别是肌动蛋白结合蛋白、破解蛋白、磷酸甘油酸变位酶1、NADH脱氢酶10亚基和膜联蛋白1.结论:液压冲击损伤能够引起星形胶质细胞发生显著的形态学改变和蛋白质谱表达改变,损伤后表达改变的蛋白质可能与星形胶质细胞的损伤后应激反应相关.
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凝血酶敏感蛋白-1在液压冲击损伤体外培养大鼠海马神经细胞中的表达及意义
目的 探讨凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)在液压冲击损伤大鼠体外培养海马神经细胞中的表达.方法 建立体外原代培养神经细胞液压冲击损伤模型,采用甲苯胺蓝染色观察神经细胞损伤程度,免疫细胞化学染色和West-ern blot技术检测神经细胞中TSP-1的表达水平.结果 液压冲击后,甲苯胺蓝染色显示,损伤组部分神经细胞胞体浓缩,细胞核固缩,呈深蓝色,多为坏死型损伤细胞.免疫细胞化学染色显示,对照组神经细胞内有一定量的TSP-1表达,损伤组神经细胞内TSP-1表达增多,阳性细胞数目增多.Western blot结果显示,对照组和损伤组光密度值分别为0.937±0.194与2.318±0.495,损伤组神经细胞TSP-1蛋白表达显著强于对照组(P＜0.01).结论 体外培养大鼠海马神经细胞中TSP-1高表达可能在液压冲击损伤过程中起重要作用.
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脑损伤动物模型研究:液压冲击损伤与控制性皮层撞击损伤的比较
目的 对两种常见的脑损伤动物模型即液压冲击损伤(FPI)模型与控制性皮层撞击(CCI)模型进行比较,评价两种脑损伤动物模型特点,为脑损伤动物模型的实验研究提供指导性意见.方法 将140只大鼠分成7组,分别制作FPI模型(分别以0.1、0.2、 0.3 MPa三种不同冲击压力,每组20只)和CCI模型(分别以1.5、 2.5、 3.5 mm三种不同撞击深度,每组20只),以假损伤组(Sham组20只)作为对照组. 24h内比较其死亡率,观察其伤后生命体征(呼吸、血压、心跳)的变化,进行神经功能缺失评分,24 h后处死大鼠取脑组织进行组织形态学评价.结果 FPI模型冲击压力达到0.3 MPa时,CCI模型撞击深度达到3.5 mm时,死亡率均明显升高;FPI模型和CCI模型均出现不同程度的生命体征变化和神经功能的缺失,且随着冲击压力和撞击深度的增加,其生命体征评分和神经功能缺失评分均呈梯度上升;FPI模型和CCI模型两组脑组织均出现明显的脑损伤形态学改变.FPI模型和CCI模型之问比较,其死亡率、生命体征评分、神经功能缺失评分及脑组织形态学变化均无明显差异.结论 采用合适的冲击压力(0.2 MPa)、撞击深度(2.5 m m)、撞击速度(2 m/s)和接触时问(85 ms),液压冲击损伤(FPI)与控制性皮层撞击(CCI)这两种方法均可制作可靠的急性脑损伤动物模型.
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大鼠脑星形胶质细胞液压冲击损伤后蛋白质差异表达研究
中枢神经系统(central nervous system,CNS)中,星形胶质细胞(astrocyte,As)是数目多的一类细胞群体,对维持脑内微环境的稳定及神经元功能具有重要作用[1-3].有研究表明,CNS创伤后,星形胶质细胞比神经元更易产生应激反应,超微结构变化也更明显[3,4].
