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直接贴壁法体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞
取90 g SPF级SD大鼠的双后肢骨髓,分别使用直接贴壁法和密度梯度离心法获得大鼠骨髓单个核细胞,用内皮培养体系EGM-2培养基进行定向诱导分化7~14 d获得大鼠内皮祖细胞。免疫荧光染色和细胞功能学鉴定内皮祖细胞,观察内皮祖细胞出现的时间和数量, CCK-8法鉴定细胞的增殖能力。与密度梯度离心法相比,直接贴壁法在内皮祖细胞出现的时间、数量和增殖能力差异有统计学意义(P<0.01)。因此,相对于密度梯度离心法,直接贴壁法培养出的内皮祖细胞分化时间更短、数量更多且增殖能力更强。
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人脐带间充质干细胞的高效分离及对小鼠免疫功能的影响
目的 建立一种从健康人脐带中分离间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的简单、经济、高效方法,并探讨其对小鼠免疫细胞的影响.方法 取经剖宫产获得的健康人脐带血管与外膜之间的胶状物并剪切成小于1 mm3的小块,用组织块贴壁法直接培养MSCs,并用获得的MSCs注射于健康C57 BL/6小鼠皮下.结果 获得的MSCs高表达CD105 、CD73、CD44和CD90,不表达CD34、CD45和人类白细胞抗原-DR,符合干细胞的各种生物学特性.结论 用简便、经济的方法获得了健康人脐带间充质干细胞,注射C57 BL/6小鼠体内后,小鼠的血细胞及T细胞亚型未改变,自身免疫系统稳定,为进一步的研究奠定了实验基础.