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殊异韦荣菌中乳酸脱氢酶重组蛋白的表达、纯化及活性分析
目的 进一步测定殊异韦荣菌中依赖性乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性,以期为研究该酶的具体功能及作用机制奠定基础,并为龋病预防和治疗提供新的思路.方法 重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中,采用不同时间及6种不同浓度的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyhhio-β-D-galactoside,IPTG)诱导乳酸脱氢酶蛋白表达,选择佳条件诱导LDH蛋白表达.并经His-标记蛋白纯化柱(HisTRAP FF柱)提纯,用LDH活性试剂盒测定蛋白活性.结果 pET-28a-LDH转入BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示适表达条件分别为IPTG终浓度0.4 mmol/L、30℃诱导8h,IPTG终浓度0.4 mmol/L、30 ℃诱导6h.经BandScan 5.0软件分析,pET-28a-LDH质粒转化BL21(DE3)表达相对含量为9.0％,高于Rosetta(DE3)的6.1％；LDH活性试剂盒测定的蛋白活性值为13.79.结论 本项研究获得了LDH蛋白的适诱导条件,并测出殊异韦荣菌中依赖性LDH的活性,为进一步研究LDH的功能及在龋病防治中的作用奠定了基础.
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乙肝肝硬化患者肠道微生物元基因组学的研究
目的 比较分析乙肝肝硬化患者与正常人远端肠道微生物群的差异,探讨乙肝肝硬化与肠道微生物群变化的关系.方法 选取11例乙肝肝硬化患者及20例正常人,提取其肠道微生物元基因组,采用高通量Solexa测序方法,通过基因比对、主成分分析、属种定量及功能代谢组成等生物信息学分析方法,找出疾病相关的属种和基因信息.结果 与结论属种定量及组成分析发现,乙肝肝硬化患者存在不同程度的肠道菌群失调,表现为肠杆菌科(尤其是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和志贺菌属)以及韦荣球菌属富集(P<0.05),拟杆菌属缺失(P<0.05);功能及代谢分析发现,乙肝肝硬化患者富集较多的执行氨基酸和碳水化合物膜转运及代谢功能的基因.
