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兔角膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达
角膜发生炎性损伤或机械损伤时,角膜基质细胞增生活化为角膜成纤维细胞,在角膜损伤修复过程中起着极其重要的作用,该过程涉及一系列复杂的细胞因子的参与,其中的机制尚未完全阐明.结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是一类新近发现的多肽生长因子,是创伤处组织修复再生过程的主要调节因子.我们通过测定体外培养的兔眼角膜成纤维细胞CTGF mRNA的表达及其对细胞增生的影响,探讨该生长因子参与角膜损伤修复的可能机制.
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羟基磷灰石表面修饰的人工角膜钛支架体外生物相容性研究
目的 采用细胞培养法观察人工角膜纯钛支架经羟基磷灰石(HA)表面修饰后,其生物相容性是否增加.方法 采用第4～6代兔角膜基质成纤维细胞直接接种于HA-Ti、Ti及盖玻片表面,培养3、24、48、72h后,用丫啶橙染色法观察材料表面细胞的黏附、伸展和增殖情况,在扫描电子显微镜下观察材料表面的细胞形态及细胞外基质产生情况.结果 细胞接种3、24、48、72h后,HA-Ti表面的活细胞数多于其他材料表面(P＜0.05).细胞接种3h,细胞扩展面积:HA-Ti＞盖玻片＞Ti.48 h后扫描电子显微镜观察发现HA-Ti表面的细胞扩展面积大,细胞张力丝长.72 h后,HA-Ti表面完全被胶原覆盖.结论 HA表面修饰增加了人工角膜纯Ti支架的生物活性.
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机械牵张对兔角膜成纤维细胞细胞外基质基因表达的影响
目的 研究机械牵张与白介素-1β3(IL-1β)联合作用对兔角膜成纤维细胞细胞外基质相关基因表达的影响.方法 对原代提取的兔角膜成纤维细胞进行牵张幅度15％、频率0.1 Hz的周期性牵张12、24、36 h,同时给予IL-1β处理,采用实时荧光定量PCR检测细胞基质金属蛋白酶(MMPs)、基质金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMP-1)和Ⅰ型胶原α1(Collagen Ⅰα1)mRNA表达变化水平.结果 IL-1β单独作用可以诱导角膜成纤维细胞MMP-1、MMP-3和MMP-9 mRNA表达;MMP-1和MMP-3 mRNA表达随时间而降低,MMP-9、TIMP-1、Collagen Ⅰα1 mRNA则随时间而增加;IL-1β3与机械牵张联合作用使MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA表达水平上调,TIMP-1和Collagen Ⅰα1 mRNA表达下调,且具有时间依赖.单独机械牵张使Collagen Ⅰα1 mRNA表达下降,IL-1β与机械牵张联合作用使其表达进一步下调,且具有时间依赖性.结论 机械牵张与炎性因子联合作用可加剧角膜组织破坏,促进角膜膨隆的发生发展.
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力学刺激对角膜成纤维细胞碱性成纤维细胞生长因子表达的影响
目的 研究在体及离体条件下不同力学环境对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响,探索力学因素在准分子激光原位角膜磨镶术(laser assisted in situ keratomileusis,LASIK)术后角膜损伤修复中的作用.方法 建立不同切削量的LASIK手术动物模型,使在体角膜处于不同力学环境中,并于LASIK术后1周和1月处死实验动物提取组织蛋白.此外,采用Flexcell 4000细胞力学加载系统对原代提取的兔角膜成纤维细胞施加频率为0.1 Hz、拉伸幅度分别为5％、10％和15％的周期性机械拉伸,并于拉伸后6h和24h后取细胞培养液上清.采用ELISA方法检测bFGF含量.结果 LASIK术后1周,角膜基质床残余30％组与对照组相比,bFGF含量显著增高(P＜0.05)；术后1月同落至正常水平,各组之间无显著性差异.不同时间点同一手术方式之间比较发现,仅30％组1周和1月有显著差异(P＜0.05).体外周期性拉伸实验表明拉伸6h后,15％拉伸组bFGF含量较对照组显著增高(P＜0.05),24h后显著性降低(P＜0.05).结论 力学因素参与了早期角膜组织及角膜成纤维细胞bFGF表达的调节,bFGF在LASIK术后角膜组织修复中发挥了一定作用.
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结缔组织生长因子对角膜成纤维细胞α5β1整合素表达的影响
目的:观察结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)对体外培养的角膜成纤维细胞α5β1整合素表达的影响.方法:体外培养兔角膜成纤维细胞,经0.5、5、50和500 ng/ml CTGF处理24 h后,用免疫组化染色检测角膜成纤维细胞α5β1整合素的表达情况.结果:与对照组相比,0.5、5、50和500 ng/ml的CTGF能呈剂量依赖性地促进角膜成纤维细胞α5β1整合素的表达(P<0.01).结论:一定浓度的CTGF能促进角膜成纤维细胞α5β1整合素的表达,它可能参与角膜基质损伤修复过程中角膜成纤维细胞与细胞外基质以及角膜成纤维细胞之间的黏附和角膜成纤维细胞的移行过程.
关键词： 结缔组织生长因子/治疗应用 角膜成纤维细胞 整合素 -
来源于全飞秒激光小切口微透镜摘除术的基质层人角膜成纤维细胞的原代培养与鉴定
目的 评价体外培养与鉴定行全飞秒激光小切口微透镜摘除术(small incision lenticule extraction,SMILE)的近视患者角膜基质层来源的人角膜成纤维细胞的可行性.方法 8例16眼行SMILE的近视患者的角膜基质层组织分别进行组织块培养,采用细胞形态学观察及免疫细胞化学法进行鉴定.结果 8例SMILE来源的基质层人角膜成纤维细胞全部原代培养成功并稳定传代,细胞呈长梭形或三角形；免疫细胞化学鉴定:波形蛋白染色阳性,而角蛋白、结蛋白、S-100染色均为阴性.结论 SMILE来源的近视患者的角膜基质层是人角膜成纤维细胞培养的方便的组织来源.
关键词： 人角膜基质 角膜成纤维细胞 全飞秒激光小切口微透镜摘除术 细胞原代培养 -
TGF-β1诱导体外培养角膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达
目的观察转化生长因子-β1(transfomming growth factor-β1,TGF-β1)对体外培养的角膜成纤维细胞结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的诱导表达作用.方法体外培养的角膜成纤维细胞分实验组和对照组,对照组弃原培养液,加无血清培养液继续培养,实验组用不同浓度的TGF-β1(0.1μg·L-1、1μg·L-1、10μg·L-1)处理24 h,用RT-PCR方法检测角膜成纤维细胞CTGFmRNA的表达情况.结果1μg·L-1和10μg·L-1 TGF-β1处理组CTGF/GAPDH像素比值分别为0.35±0.05和1.25±0.10,均较对照组高(0.13±0.02),差异具有统计学意义,同时CTGF/GAPDH比值随TGF-β1浓度增加而增加.结论TGF-β1可以诱导角膜成纤维细胞CTGF的表达,在角膜成纤维细胞中CTGF也可能是TGF-β1对细胞起作用的下游信号分子.
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羊膜对角膜成纤维细胞CTGF表达及凋亡的影响
目的观察羊膜对在其基质面生长的角膜成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达以及凋亡的影响.方法将传代的家兔角膜成纤维细胞接种于羊膜基质面,培养5 d后,用RT-PCR检测角膜成纤维细胞CTGF mRNA表达的变化;用流式细胞仪观察羊膜对IL-1诱导的角膜成纤维细胞凋亡的影响.结果在羊膜基质面培养的角膜成纤维细胞,其CTGF/GAPDH像素比值较对照组低,与对照组比较有明显统计学差异(P＜0.05);羊膜能降低IL-1诱导的角膜成纤维细胞凋亡率,与对照组比较有明显统计学差异(P＜0.01).结论羊膜不仅抑制体外培养的角膜成纤维细胞CTGF mRNA的表达,而且能抑制角膜成纤维细胞的凋亡,可能部分解释羊膜减轻角膜基质损伤修复反应和抗眼表瘢痕形成的机制.
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CTGF对角膜成纤维细胞生物学功能的影响
目的观察结缔组织生长因子(CTGF)对体外培养的角膜成纤维细胞增殖、向肌成纤维细胞转化和合成细胞外基质的影响.方法体外培养兔角膜成纤维细胞,经0.5、5、50和500 ng/mL CTGF处理24 h后,分别进行增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色、银染核仁组成区染色(AgNOR)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化染色以及Ⅲ型胶原(CA-Ⅲ)、纤维连接蛋白(FN)和层黏蛋白(LM)免疫组化染色,检测CTGF对角膜成纤维细胞增殖、向肌成纤维细胞转化和细胞外基质合成的影响.结果与对照组相比,0.5、5、50和500 ng/mL的CTGF能剂量依赖性地促进角膜成纤维细胞PCNA表达,增加核仁银染颗粒数,促进α-SMA的表达,同时能促进角膜成纤维细胞CA-Ⅲ、FN和LM的合成(P＜0.01).结论一定质量浓度的CTGF可能在角膜损伤修复过程中发挥重要作用.
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bFGF对角膜成纤维细胞增殖及胶原合成的影响
目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF )对兔角膜基质成纤维细胞增殖及胶原合成的影响.方法 (1)分组培养正常和切除前板层的角膜成纤维细胞,分别于细胞贴壁后的3、6、9、12、15天观察细胞生长情况,以及bFGF对细胞增殖的影响,并计数.(2)将兔眼分为对照组和实验组,等面积、等深度切除角膜板层后,对照组滴生理盐水,实验组滴bFGF滴眼液,15天后取材,常规电镜制片,观察并比较角膜基质层胶原合成的状况.结果(1)bFGF可显著促进正常和受损角膜成纤维细胞的增殖.(2)实验组与对照组相比,前者胶原纤维密度高,纤维结构排列明显有序、规律.结论 bFGF可促进角膜成纤维细胞增殖和胶原的合成,使基质层纤维排列更有序.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 角膜成纤维细胞 胶原纤维 -
转化生长因子β调节培养的人角膜基质细胞MMP-2和MMP-9的分泌
目的观察转化生长因子β(TGF-β)对培养的人角膜基质细胞分泌MMP-2和MMP-9的调节作用,探讨TGF-β治疗非感染性角膜溃疡的潜在可能性.方法采用酶谱法检测人角膜基质细胞MMP-2和MMP-9的分泌,并观察TGT-β对MMP-2和MMP-9分泌的调节作用.结果培养的人角膜基质细胞分泌MMP-2和MMP-9,TGF-β抑制MMP-9的活性,且随TGF-β质量浓度增加而增强,随TGF-β作用时间延长而增强;对MMP-2的活性,TGF-β有较弱的促进作用.结论TGF-β作为一种MMP-9的抑制剂,在促进非感染性角膜溃疡愈合方面很有潜力.
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苦参碱对人角膜成纤维细胞细胞周期和凋亡的影响
目的 观察苦参碱对体外培养的人角膜成纤维细胞周期和凋亡的影响.方法 将分离培养的人角膜成纤维细胞(HCFs)纯化后,用不同浓度的Mat干预培养的HCFs的生长,并以0.1％地塞米松作为对照,在干预48 h后用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡.结果 Mat在80 mg/L以下的药物浓度处理HCFs 48 h后,未引起其明显的凋亡率的改变,并能使其细胞周期阻滞于G2/M期.而160 mg/L以上的药物浓度处理HCFs 48 h后,引起明显的细胞凋亡.结论 Mat在80 mg/L以下的浓度范围内,既能阻滞HCFs的细胞周期,又不增加其凋亡的发生率.
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机械牵拉与前列腺素E2联合作用下调圆锥角膜成纤维细胞赖氨酰氧化酶家族基因表达
为了研究机械牵拉与前列腺素E2(PGE2)对赖氨酰氧化酶(LOXs)家族基因表达的影响,本文对体外培养的正常人及圆锥角膜患者角膜成纤维细胞给予PGE2处理,并进行幅度为12％、频率为0.1 Hz的周期性机械牵拉12h,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测LOXs家族基因的表达情况.研究结果显示,圆锥角膜患者的角膜成纤维细胞LOXs家族基因表达量普遍低于正常角膜;与静态培养组比较,单独机械牵拉使正常组的赖氨酰氧化酶样蛋白(LOXL)中的LOXL-2和LOXL-4基因表达上调,并使得圆锥角膜组的LOXL-3和LOXL-4基因表达下调;机械牵拉与PGE2联合作用则使正常组的LOXL-4以及圆锥角膜组除LOXL-1之外的所有LOXs基因表达均下调.根据以上研究结果可提示,以机械牵拉和PGE2同时作用,将下调圆锥角膜患者角膜成纤维细胞的LOXs家族基因表达,这将可能导致角膜胶原交联受阻,使胶原纤维之间的黏附力下降,胶原板层之间产生相对滑动,影响角膜结构稳定性,促进角膜发生圆锥膨隆.本文通过探讨研究力学刺激与炎性因子对LOXs家族基因表达的影响,有助于更好地理解圆锥角膜发生发展的可能机理,为圆锥角膜预防及治疗提供参考.
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肿瘤坏死因子对圆锥角膜成纤维细胞基质金属蛋白酶及其抑制剂表达的影响
本文主要研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对圆锥角膜成纤维细胞基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMPs)表达的影响.利用酶消化法提取正常角膜和圆锥角膜成纤维细胞并对其施加不同浓度的TNF-α作用,通过蛋白质印迹法和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应分别检测细胞上清夜中MMPs蛋白和细胞中TIMPs基因的表达.结果发现圆锥角膜成纤维细胞上清液中存在MMP1的活性形式,且TNF-α能使之表达上调;TNF-α能促进圆锥角膜成纤维细胞MMP2、MMP3、MMP9表达,但使其TIMP1、TIMP2表达降低.TNF-α可能通过调节MMPs和TIMPs的表达在圆锥角膜的发生发展中起着重要的作用.
关键词： 肿瘤坏死因子 圆锥角膜 角膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶抑制剂
