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Salubrinal对人晶状体上皮细胞中内质网应激的影响
目的 探讨内质网应激(ERS)阻滞剂Salubrinal对人晶状体上皮细胞(HLEC)的保护作用及机制.方法 实验研究.应用H2O2诱导HLEC B3系细胞(HLE-B3)建立氧化应激模型,诱导ERS的发生.分别在H2O2干预和不干预的情况下,加入不同浓度的Salubrinal(10、15、20、25、30、35 μmol/L)培养24 h,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组HLE-B3的增殖活性.实验分组为3组,A组(正常对照组)、B组(H2O2200μmol/L组)、C组(H2O2200μmol/L+Salubrinal 25μmol/L组).采用原位缺口末端转移酶标记法(TUNEL)和流式细胞仪(FCM)检测药物作用48 h后HLE-B3的凋亡情况.Westernblot检测不同时间点下各组葡萄糖调节蛋白质78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、半胱氨酸蛋白酶12(Caspase-12)、真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)的磷酸化型p-elF2α的变化.单因素方差分析用于组间均数的多重比较,当方差齐时组间两两差异比较采用Dunnett t检验,当方差不齐时Dunnett's T3用作两两比较.结果 CCK-8试剂盒结果显示,没有H2O2干预时,不同浓度的Salubrinal对HLE-B3的细胞活性无明显抑制作用,存活率分别为(98.6±3.3)％,(98.7±2.6)％,(99.4±3.2)％,(98.6±1.9)％,(98.8±2.5)％,(99.3±3.2)％,(99.5±2.4)％,差异无统计学意义(F=0.09,P=0.10);应用H2O2干预时,随着Salubrinal浓度的升高,HLE-B3存活分别为(52.9±4.7)％,(65.0±3.6)％,(72.9±3.8)％,(84.5±3.6)％,(91.6±2.1)％,(93.1±2.9)％,(92.0±3.3)％,与对照组相比,差异有统计学意义(P值均＜0.01),当Salubrinal浓度大于25 μmol/L时,HLE-B3细胞的存活率增加不明显(P=0.56,0.88).流式细胞仪检测3组的细胞凋亡率分别为(1.9±0.7)％、(8.8±0.5)％、(4.3±0.3)％,各组之间差异有统计学意义(F=396.26,P＜0.01;与A组比较P值均＜0.01).TUNEL染色结果分别为A组(7.7±1.0)％,B组(36.9±1.0)％,C组为(16.7±2.2)％,凋亡指数差异有统计学意义(F=618.39,P＜0.01,与A组比较P＜0.01).Western blot结果表明:随着H2O2作用时间的延长,B组中p-elF2α在6h较初始时间点增加(2.16±0.38)倍,GRP78在12h较初始时间点增加(2.56±0.15)倍,CHOP在12h开始升高,持续至24 h,后又逐渐降低,在48 h升高量达初始时间点的(2.49±0.23)倍,Caspase-12在48 h表达明显增加,是初始时间点的(3.53±0.30)倍;C组与B组相比,GRP78、CHOP、p-elF2α表达量增加,而Caspase-12表达降低(GRP78:F=37.85,P＜0.01;CHOP:F=61.09,P＜0.01;Caspse-12:F=22.27,P＜0.01;p-eiF2α:F=15.11,P＜0.01).结论 Salubrinal可以通过抑制内质网应激的凋亡通路,对H2O2诱导的HLE-B3凋亡起保护作用.
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阿魏酸钠对缺血预处理后大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
背景:缺血性脑损伤后,如何减少神经细胞的死亡促进神经功能的恢复?脑缺血预处理在一定程度上可减轻再次缺血导致的缺血性脑损伤.阿魏酸钠亦被证实能减少脑缺血后的神经元凋亡的发生.而阿魏酸钠是否能增强脑缺血预处理的神经保护作用?目的:探讨阿魏酸钠联合缺血预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用.设计:随机对照动物实验.单位:江西医学院第二附属医院神经外科,江西医学院生理教研室,江西医学院泌尿外科研究所.材料:实验于2001-05/2002-04在江西医学院第二附属医院神经外科实验室完成.雄性Wistar大鼠85只,体质量250～300 g.方法:大鼠随机分为四组:①非缺血对照组(10只):仅结扎双侧椎动脉而不夹闭双侧颈总动脉.②缺血对照组(25只):结扎双侧椎动脉48 h,夹闭颈总动脉10 min.③缺血预处理组(25只):结扎双侧椎动脉48 h,夹闭颈总动脉2 min后24 h再次夹闭颈总动脉10 min.④阿魏酸钠联合缺血预处理组(25只):缺血预处理后,再次夹闭颈总动脉前30 min,尾静脉注射阿魏酸钠(200mg/kg).非缺血对照组分为再灌注后2,7 d二个亚组(各5只);缺血对照组、缺血预处理组及阿魏酸钠联合缺血预处理组又分为再灌注后6,12,24 h,2,7 d五个亚组(各5只).各组在相应时点将大鼠断头取脑,于视交叉后2.2 mm切取冠状脑片,观察阿魏酸钠联合缺血预处理在脑缺血再灌注时对皮层和海马CA1区神经元数及凋亡细胞数的影响.主要观察指标:皮层和海马CA1区神经元数及凋亡细胞数.结果:实验大鼠85只均进入结果分析.①大脑皮层及海马CA1神经元计数:缺血7d时,缺血预处理组和阿魏酸钠+缺血预处理组高于缺血对照组(268±8.5,244±12.5,135±5.6,P＜0.01).②大脑皮层及海马CA1区TUNEL阳性细胞计数:阿魏酸钠+缺血预处理组低于缺血预处理组和缺血对照组(12 h:1.2±0.8,15.5±2.1,39.8±3.9;24 h:1.8±1.6,39.3±11.8,191.3±19.1;2d:2.8±1.2,68.3±13.6,328.4±24.0,P＜0.01);缺血预处理组低于缺血对照组(P＜0.01).结论:缺血预处理可减少缺血区神经元凋亡细胞数,阿魏酸钠联合缺血预处理可以进一步加强此效应,对脑缺血再灌注损伤起保护作用.
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维甲酸和桂皮酸诱导HL-60细胞分化的研究
目的探讨维甲酸和桂皮酸联合对人早幼粒白血病细胞(HL-60)诱导分化作用.方法用1μmol/l全反式维甲酸(ATRA)和2.5 mmol/L桂皮酸单独和联合处理HL-60细胞后,观察细胞形态的改变,进行细胞增殖速度、硝基四氮唑蓝(NBT)还原反应、过氧化酶染色的测定.结果 ATRA和桂皮酸都能使HL-60细胞形态向成熟粒细胞转变,两者对HL-60细胞增殖都有明显抑制作用,都能使细胞的BNT还原反应显著增强(P＜0.01).前者强于后者.过氧化酶染色两者均为弱阳性或阴性.两者联合作用能使分化作用增强,但未显示相加效应.结论 ATRA和桂皮酸都具有诱导HL-60细胞分化作用,前者优于后者,两者联合分化作用增强.
