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细胞成球能力文献资料
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慢病毒介导的异柠檬酸脱氢酶1基因R132H突变过表达抑制脑胶质瘤LN229细胞的成球能力
目的 研究慢病毒介导的异柠檬酸脱氢酶1 (IDH1) R132H突变体过表达对脑胶质瘤LN229细胞成球能力的影响.方法 构建IDH1 R132H突变型慢病毒载体介导的LN229、U87和H4脑胶质瘤细胞株,经嘌呤霉素抗性筛选,获得稳定表达IDH1 R132H的细胞株,以IDH1野生型(WT)的胶质瘤细胞株为对照.利用荧光显微镜和Western blot的方法检测稳定转染IDH1 R132H细胞株的表达情况.使用无血清培养基培养LN229细胞,并加入B27添加剂、表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)后,观察IDH1 R132H突变对LN229细胞成球能力的影响.结果 经测序分析,成功构建了IDH1 R132H突变型慢病毒表达载体.慢病毒包装后体外感染脑胶质瘤细胞株LN229、U87和H4,荧光显微镜下均可见绿色荧光蛋白的表达;Western blot检测结果显示,与转染IDH1 WT对照组相比,转染IDH1 R132H突变型载体的3种细胞株IDH1 R132H均表达阳性;转染IDH1 R132H慢病毒载体的LN229细胞的成球能力较转染IDH1 WT的对照组明显减弱(P＜0.05).结论 慢病毒介导的IDH1基因R132H突变过表达抑制脑胶质瘤LN229细胞的成球能力,IDH1基因R132H突变可能在脑胶质瘤干性中起关键作用.
