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胶质瘤术中超声表现与免疫组化分子标记物表达的相关性
目的 探讨脑胶质瘤术中超声声像图特征与免疫组化分子标记物的相关性.方法 收集经手术病理证实的116例胶质瘤患者的资料,分析其声像图特征(肿瘤主要部位、大径、边界、囊变、钙化、瘤周水肿程度及CDFI血流分级)与免疫组化分子标记物Ki-67、异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)表达的相关性.结果 单因素分析显示,肿瘤边界、瘤周水肿及CDFI血流分级在Ki-67阴性与阳性患者间,肿瘤边界、囊变、瘤周水肿在IDH1阴性与阳性患者间差异均有统计学意义(P均＜0.01).多因素分析显示,边界清晰、瘤周水肿程度高、CDFI血流丰富的胶质瘤Ki-67阳性率高,边界模糊、瘤周水肿程度低的胶质瘤IDH1阳性率高.结论 超声声像图显示脑胶质瘤患者肿瘤边界、瘤周水肿程度及CDFI血流对Ki67、IDH1的表达有预测价值,对术前初步判断肿瘤生物学行为及远期预后具有重要意义.
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胶质母细胞瘤灌注成像与异柠檬酸脱氢酶1突变状态的相关性分析
目的 探讨使用灌注成像来预测胶质母细胞瘤的异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)突变状态的应用价值.方法 回顾性分析2014年9月-2016年2月山西省人民医院神经外科收治的30例野生型IDH1的胶质母细胞瘤患者(IDH1w组)和30例突变型IDH1胶质母细胞瘤患者(IDH1m组)的病例资料.使用动态对比增强磁共振成像(DCE-MRI)数据测量肿瘤的Ktrans、Ve值,使用动态磁敏感对比增强磁共振成像(DSC-MRI)数据测量肿瘤的rCBF、rCBV值.采用t检验比较IDH1w组和IDH1m组胶质母细胞瘤患者的Ktrans、Ve、rCBV、rCBF值肿瘤分级的差异,各参数以均数±标准差((x)±s)表示.应用ROC曲线分析获得Ktrans、Ve、rCBV、rCBF值,鉴别IDH1w和IDH1m胶质母细胞瘤的佳阈值及其敏感性和特异性.结果 IDH1w组患者的Ktrans、Ve、rCBF、rCBV值显著高于IDH1m患者(IDH1w组:0.161±0.183,0.613±0.271,2.658±1.364,2.431±1.252;IDH1m组:0.035±0.040,0.125±0.070,1.572±0.412,1.386±0.565),IDH1w组与IDH1m组之间Ktrans、Ve、rCBF、rCBV值差异均具有统计学意义(P＜0.05).曲线下面积(AUC值)Ktrans、Ve、rCBF、rCBV值分别为0.850、0.873、0.739、0.772,差异无统计学意义.4个参数的结合增加了诊断性能(AUC=0.915).IDH1w组患者的Ktrans、Ve、rCBF、rCBV值明显高于IDH1m组(P＜0.05).结论 来源于胶质母细胞瘤灌注成像的Ktrans、Ve、rCBF、rCBV值计算结果对于预测IDH1突变状态是有用的,该方法不仅对于脑胶质母细胞瘤的分型诊断具有重要的价值,而且在胶质母细胞瘤分型的术前无创评估中具有重要价值,并且对于患者预后的预测具有借鉴意义.
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星形细胞胶质瘤中IDH1基因突变及DNA甲基化分析
目的 分析星形细胞胶质瘤患者IDH1基因突变分布与病理级别、预后的关系；探讨DNA甲基化是否为IDH1基因调控的模式之一.方法 直接测序法检测91例星形细胞胶质瘤组织样本中IDH1的突变分布；重亚硫酸盐测序法检测9例星形细胞胶质瘤中IDH1启动子DNA甲基化水平.结果 91例星形细胞胶质瘤患者中35例存在IDH1突变(38.5％),均为R132H突变.WHO Ⅰ级肿瘤中未检测到IDH1突变；WHOⅡ～Ⅳ级原发性星形细胞胶质瘤中IDH1突变率分别为70.6％、62.1％、12.5％,突变率与病理级别呈负相关(r=0.522,P＜0.001);7例继发性多形性胶质母细胞瘤中有5例(71.4％)发生突变,突变类型与原发肿瘤一致.IDH1突变型胶质瘤患者中位生存期较IDH1野生型患者明显延长(P＜0.05).9例胶质瘤患者IDH1启动子均未检测到DNA甲基化改变.结论 IDH1突变在星形细胞胶质瘤中发生频繁,是预后改善的指标；DNA甲基化可能未参与IDH1基因表达的调控.
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慢病毒介导的异柠檬酸脱氢酶1基因R132H突变过表达抑制脑胶质瘤LN229细胞的成球能力
目的 研究慢病毒介导的异柠檬酸脱氢酶1 (IDH1) R132H突变体过表达对脑胶质瘤LN229细胞成球能力的影响.方法 构建IDH1 R132H突变型慢病毒载体介导的LN229、U87和H4脑胶质瘤细胞株,经嘌呤霉素抗性筛选,获得稳定表达IDH1 R132H的细胞株,以IDH1野生型(WT)的胶质瘤细胞株为对照.利用荧光显微镜和Western blot的方法检测稳定转染IDH1 R132H细胞株的表达情况.使用无血清培养基培养LN229细胞,并加入B27添加剂、表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)后,观察IDH1 R132H突变对LN229细胞成球能力的影响.结果 经测序分析,成功构建了IDH1 R132H突变型慢病毒表达载体.慢病毒包装后体外感染脑胶质瘤细胞株LN229、U87和H4,荧光显微镜下均可见绿色荧光蛋白的表达;Western blot检测结果显示,与转染IDH1 WT对照组相比,转染IDH1 R132H突变型载体的3种细胞株IDH1 R132H均表达阳性;转染IDH1 R132H慢病毒载体的LN229细胞的成球能力较转染IDH1 WT的对照组明显减弱(P＜0.05).结论 慢病毒介导的IDH1基因R132H突变过表达抑制脑胶质瘤LN229细胞的成球能力,IDH1基因R132H突变可能在脑胶质瘤干性中起关键作用.
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焦磷酸测序定量检测脑胶质瘤IDH1R132H突变
目的 建立检测脑胶质瘤患者异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)R132H突变的焦磷酸测序方法,并探讨其在临床上的应用性.方法 回顾性纳入中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)数据库中30例脑胶质瘤患者的临床资料和石蜡包埋样本,其中15例为IDH1 R132H野生型,15例为IDH1R132H突变型.采用焦磷酸测序方法检测样本中IDH1 R132H的突变情况,并与免疫组织化学染色结果进行比较分析.结果 30例脑胶质瘤患者焦磷酸测序结果显示,IDH1 132位点CAT所占比例为10％～52％,其中15例IDH1 RI32H野生型样品均＜19％,而其余15例IDH1 R132H突变型样品均＞27％.免疫组织化学染色结果显示,15例IDH1 R132H野生型样品为阴性,其余15例IDH1 R132H突变型为阳性,其中8例为阳性,7例为强阳性.相关性分析结果显示,免疫组织化学染色结果为阴性的样本,焦磷酸测序定量检测的IDH1 R132H突变比例均＜20％ (10％-18％);而免疫组织化学染色结果为阳性的样本,IDH1 R132H突变比例均＞20％(28％～52％);两者间的差异有统计学意义(P＜0.05),且不存在重叠区域.结论 基于焦磷酸测序平台的检测方法可定量分析脑胶质瘤样本IDH1 R132H的突变状态,适合作为临床分子病理学的常规检测.
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异柠檬酸脱氢酶1基因突变焦磷酸测序检测方法的建立
目的建立异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenase 1,IDH1)基因突变的焦磷酸测序检测方法,确定该方法的检测灵敏度。分析焦磷酸测序法与直接测序法对于鉴定IDH1突变的差异。方法构建携带野生型和突变型IDH1基因的质粒,使用质粒优化焦磷酸测序方法。使用已知比例的野生型和突变型质粒作为模版,确定突变的检测灵敏度。针对96例胶质瘤患者手术切除标本的基因组DNA,分别使用直接测序法和焦磷酸测序法,鉴定IDH1基因突变类型,并比较。结果使用焦磷酸测序能够检测到低至2%的IDH1突变。直接测序检出突变阳性率为32.3%、焦磷酸测序检出突变阳性率为74.0%。结论焦磷酸测序法检测IDH1基因突变灵敏可靠,适合临床分子诊断。
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异柠檬酸脱氢酶作为肺癌标志物的临床意义
目的：探讨异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）作为肺癌标志物的临床意义。方法 RT-PCR检测收集的50例肺癌组织和对应的癌旁组织中IDH1、激活蛋白激酶C1受体（RACK1）、过氧化物氧化还原酶2（PRDX2）的表达水平。 ELISA检测收集的50例肺癌患者及20例正常人血浆标本中IDH1的表达水平。以肺癌细胞A549为研究对象，转染IDH1 siRNA抑制肺癌细胞中IDH1的表达，MTT检测转染后1、2、3、4、5、6 d的肺癌细胞增殖情况。流式细胞仪检测转染后48 h的细胞凋亡情况。结果 IDH1、RACK1、PRDX2在肺癌组织中均过度表达，IDH1相对于癌旁组织表达量上调多。20例正常人血浆中IDH1水平中位数为3.48 U／L，50例肺癌患者血浆中 IDH1水平中位数为6.55 U／L，组间比较差异显著（ P＜0.01）。 IDH1 siRNA组肺癌细胞A549细胞存活率与siRNA control组相比差异显著（P＜0.05，P＜0.01）。 siRNA control组细胞凋亡率为0.12±0.01，与IDH1 siRNA组（0.41±0.02）比较差异显著（P＜0.01）。结论 IDH1在肺癌组织和血浆中高表达。抑制IDH1可以抑制肺癌细胞增殖，促进癌细胞凋亡。 IDH1可以作为肺癌标志物用于诊断肺癌。
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IDH1在肿瘤发生发展中的作用及其调控机制的研究进展
持续分裂和增殖是肿瘤细胞的显著特征,为维持这一特征,肿瘤细胞的代谢发生一系列变化,包括从氧化磷酸化向有氧糖酵解转变.异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)是胞质中重要的代谢酶,除催化异柠檬酸氧化脱羧生成α-KG、产生NADPH外,还可间接调节氨基酸和脂类代谢,参与氧化应激反应等.现在越来越多的研究发现,IDH1的表达及活性在某些肿瘤组织中发生了改变,与肿瘤的发生发展过程密切相关.本文综述了IDH1的结构和功能,从其在肿瘤中的活性、如何参与调节氧化应激反应、突变体及与肿瘤发生相关的信号通路(HIF-1α、AKT-mTOR)等方面对IDH1在肿瘤发生发展过程中的作用进行了阐述,并对其调控机制进行了概况总结.作为可能的肿瘤治疗新靶点,IDH1在肿瘤发生发展中的机制研究及可能的靶向性药物的发现将是今后研究的重点.
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胶质瘤IDH1和TP53突变与LOH1p/19q的表达及意义
目的 探讨胶质瘤异柠檬酸脱氢酶1 (IDH1)突变、TP53突变和1p/19q联合性缺失(LOH 1p/19q)的表达及其意义.方法 病理组织学证实的Ⅱ-Ⅲ级胶质瘤136例,采用基因片段测序检测IDH1突变,免疫组织化学检测TP53突变,荧光原位杂交法检测LOH 1p/19q的表达.结果 136例中,IDH1突变107例,TP53突变59例,LOH 1p/19q 36例.其中,同时存在IDH1突变和TP53突变共有55例(弥漫性细胞瘤24例,间变性星形细胞瘤26例,少突星形细胞瘤3例,间变性少突星形细胞瘤2例).同时存在IDH1突变和LOH 1p/19q共有26例(少突胶质细胞瘤13例,间变性少突胶质细胞瘤9例,少突星形细胞瘤2例,间变性少突星形细胞瘤2例).无一例同时存在TP53突变和LOH1p/19q.结论 联合检测IDH1突变、TP53突变和LOH1p/19q能有利于明确肿瘤分子病理分型和预后判断,可能成为未来胶质瘤基因治疗的新靶点.
关键词： 胶质瘤 异柠檬酸脱氢酶1 TP53 1p/19q联合性缺失 -
IDH1基因检测联合CD-DST药敏指导胶质瘤术后辅助化疗的临床应用分析
[目的]研究胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶1 (isocitrate dehydrogenases 1,IDH1)突变和胶滴肿瘤药敏检测技术(CD-DST)结果的关联性及指导术后辅助化疗方案的疗效分析.[方法]收集手术切除并经病理证实的高级别脑胶质瘤组织57例,新鲜标本分别对替莫唑胺等5种化疗药物进行CD-DST检测指导治疗方案,同时采用直接测序法检测肿瘤组织中IDH1基因突变情况,分析两者相关性.以CD-DST检测结果为指导治疗患者57例,比较16例行指导规范治疗与未行指导规范治疗患者的生存情况.[结果] 57例高级别脑胶质瘤患者中IDH1突变13例(22.8％),IDH1突变患者中位总生存时间显著性优于IDH1未突变患者(12.0个月vs7.5个月,P=0.002).IDH1突变患者的替莫唑胺、Vp-16、卡铂和卡莫司汀的体外敏感率高于无IDH1突变的患者,而顺铂敏感性在有无突变组差异无统计学意义.CD-DST指导的行规范治疗与未行规范治疗患者的中位总生存时间分别为12个月和8个月,差异无统计学意义(P＞0.05).IDH1突变联合CD-DST敏感指导规范治疗患者的中位总生存时间为14个月,显著性优于其他组别(P=0.019).[结论] IDH1基因检测联合CD-DST技术对于高级别脑胶质瘤术后辅助化疗方案具有一定的临床指导价值.
关键词： 胶质瘤 异柠檬酸脱氢酶1 胶滴肿瘤药敏检测技术 替莫唑胺 -
肺癌患者血清异柠檬酸脱氢酶1的检测
目的 通过检测肺癌患者血清中异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)的浓度水平,探讨IDH1在肺癌辅助诊断中的临床价值.方法 应用酶联免疫法检测肺癌患者、肺部良性疾病患者和正常健康人血清中IDH1的浓度水平,并分析其在肺癌诊断中的临床意义.结果 肺癌患者血清中IDH1的浓度水平明显高于肺部良性疾病组和正常健康人组,差异有显著统计学意义(P<0.001);血清IDH1在腺癌和鳞癌中的浓度水平显著高于小细胞肺癌,差异有显著统计学意义(P<0.001);血清IDH1在肺癌中检测的敏感性为45.2％、特异性为88.7％;血清IDH1在I期和II期肺癌中检测的敏感性为49.0％,在Ⅲ期和Ⅳ期肺癌中检测的敏感性为54.3％.结论 肺癌患者血清中IDH1的检测在肺癌的辅助诊断和早期诊断中具有非常好的临床应用前景.
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胶质瘤异柠檬酸脱氢酶1突变的生物学机制和临床意义
异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)存在于细胞质和过氧化物酶体中,是三羧酸循环中的关键限速酶.近年来研究发现IDH1突变存在于多数胶质瘤中,其代谢产生的大量2-羟戊二酸可能作为潜在致癌物参与胶质瘤的发生,同时与患者预后的改善密切相关.IDH1突变有望作为新型基因标志指导临床胶质瘤的治疗.
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脑胶质瘤组织中R132H突变型hIDH1基因双顺反子真核表达载体的构建及鉴定
[目的]以pcDNA3.1(+)为骨架,构建并鉴定人脑胶质瘤组织中含R132H突变的人源异柠檬酸脱氢酶1基因(hIDHIR132H)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列的双顺反子真核表达载体.[方法]以内部核糖体进入位点(IRES)/EGFP片段为模板,扩增出IRES/EGFP片段,并在5′末端引入3×Flag标签；通过PCR介导的定点突变法,以pCMV-sports6-hIDH1为模板,扩增hIDH1R132H基因片段,并在3′末端引入3×Flag标签；通过PCR连接两种产物后经双酶切定向克隆入pcDNA3.1(+)骨架；转化大肠杆菌后挑取阳性克隆,提取质粒进行PCR检测及基因序列测定.[结果]PCR检测7个菌落中有6个阳性克隆,DNA测序发现引入了h1DH1基因.[结论]成功构建了双顺反子真核表达载体pcDNA3.1(+)-hIDH1 R132H/3 × Flag/IRES/EGFP,为研究人胶质瘤组织中R132H突变的作用机制奠定了基础.
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异柠檬酸脱氢酶1基因突变对胶质瘤大鼠模型Ki-67表达及微血管密度的影响
目的 探讨胶质瘤大鼠模型异柠檬酸脱氢酶1 (isocitrate dehydrogenase 1,IDH1)基因突变对肿瘤细胞增殖、新生血管形成的影响.方法 成年雄性Wistar大鼠120只,随机分为变异组、未变异组、假手术组、对照组各30只,变异组、非变异组分别将IDH1基因变异、未变异肿瘤细胞悬液采用立体定向接种于大鼠脑内制备鼠脑胶质瘤模型,假手术组注入等量生理盐水,对照组仅给予常规饲养,造模后2周行MRI检查观察肿瘤生长情况,3周后处死大鼠采用免疫组织化学法检测各组大鼠脑组织肿瘤微血管密度和Ki-67抗原表达率.结果 未突变组大鼠脑胶质瘤组织Ki-67表达阳性率[(23.71±9.51)％]和微血管密度(43.63±10.03)均明显高于突变组[(17.44±7.28)％、27.80±12.28]、假手术组(0、6.11±3.43)和对照组(0、6.96±3.91)(P＜0.05);变异组高于假手术组和对照组(P＜0.05);假手术组与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 IDH1基因突变可降低肿瘤新生血管形成,抑制肿瘤细胞增殖活性.
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异柠檬酸脱氢酶1在大脑胶质瘤组织中表达的意义
目的 探究异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在大脑胶质瘤中表达的临床意义.方法 采用免疫组化法检测30例大脑胶质瘤组织(Ⅰ ～ Ⅱ级胶质瘤11例、Ⅲ ～ Ⅳ级胶质瘤19例)和30例正常脑组织中IDH1的表达.结果 Ⅰ ～ Ⅱ级胶质瘤组织、Ⅲ ～ Ⅳ级胶质瘤组织中IDH1表达高于正常脑组织,Ⅲ ～ Ⅳ级胶质瘤组织中IDH1表达高于Ⅰ ～ Ⅱ级胶质瘤组织,差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 脑胶质瘤组织中IDH1水平明显增高,提示其可能参与了脑胶质瘤的发生、发展过程.
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胶质瘤细胞中异柠檬酸脱氢酶1基因突变对肿瘤细胞的生长抑制及作用机制
目的 观察胶质瘤细胞中异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)基因突变对肿瘤细胞的生长抑制作用并探讨其机制.方法 构建表达IDH1 R132H突变体的慢病毒载体,转染U87胶质瘤细胞,通过免疫荧光染色观察细胞增殖,原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡,水溶性四唑盐(WST)法绘制细胞生长曲线,比色法检测细胞内还原性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)、还原性谷胱甘肽(GSH)含量,荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;构建裸鼠动物模型,绘制肿瘤生长体积曲线与重量柱形图.结果 表达IDH1 R132H突变体的胶质瘤细胞生长明显抑制,免疫荧光染色以及TUNEL法证实细胞增殖减少、凋亡增多;细胞内NADPH水平降低伴随GSH含量降低和ROS蓄积,H2O2(1 mmol/L)可明显增加胶质瘤细胞的生长抑制作用,GSH(1 mmol/L)则可减弱抑制作用.结论IDH1基因R132H突变可显著抑制胶质瘤细胞生长,细胞内GSH含量降低和ROS蓄积可能是其重要机制.
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异柠檬酸脱氢酶1基因突变增加胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性
目的 探讨胶质瘤细胞异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)基因突变对替莫唑胺(TMZ)细胞毒性的影响.方法 将培养的U87胶质瘤细胞分组转染含空载体(空载体组)、野生型IDH1基因(野生组)和R132H突变型IDH1基因(突变组;IDH1第132位的精氨酸被组氨酸所取代)质粒,利用液相色谱串联质谱法检测细胞上清液中2-羟基戊二酸(2-HG)水平、噻唑蓝法检测细胞增殖活性、实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测细胞caspase 3 mRNA和蛋白质表达;将含三种不同质粒的U87细胞接种大鼠建立荷瘤大鼠模型并观察大鼠经TMZ治疗后60 d存活率.结果 与空载体组和野生组比较,突变组细胞上清液中2-HG水平、细胞caspase 3 mRNA和蛋白质表达水平均显著升高(P＜0.05),而细胞增殖活性显著下降(P＜0.05);TMZ治疗后60 d,突变组大鼠存活率显著升高(P＜0.05);空载体组和野生组之间均无统计学差异(P＜0.05).结论 IDH1 R132H基因能够增加TMZ对神经胶质瘤细胞的细胞毒性作用并提高其治疗荷瘤大鼠的存活率.
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急性髓系白血病中异柠檬酸脱氢酶1基因突变的生物信息学分析
目的 从分子水平揭示合并异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)基因突变的正常核型急性髓系白血病(CN-AML)患者的发病机制,为临床诊疗提供新工具.方法 在GEO 中检索IDH1突变的AML芯片数据,使用BRB-Array Tools、GSEA、MILANO、GAD、GATHER等生物信息学工具进行统合分析.结果 经过2组样本数据的统合分析,发现12个差异表达基因,主要集中在细胞粘附、免疫防御反应等生物学过程.与参与凋亡、Toll-like、Jak-Stat等信号通路有关.GSEA分析表明IDH1相关基因分别涉及到脂质代谢、髓系细胞分化和缺氧调节等方面.结论 利用生物信息学的方法能提取基因芯片有效信息,为进一步深入研究IDH1在CN-AML的发病机制中的作用开辟新思路.
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IDH1基因在非小细胞肺癌化疗耐受中的作用
目的 探讨异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)在人非小细胞肺癌化疗耐受中的作用及可能机制.方法 免疫组织化学和Western blot检测人正常肺组织、未经化疗和多次化疗的非小细胞肺癌组织中IDH1的蛋白表达;构建稳定下调IDH1表达的肺癌细胞株A549,MTT法检测该细胞对化疗药物顺铂和紫杉醇的敏感性.结果 在经多次化疗的非小细胞肺癌患者中,免疫组化和Western blot结果显示IDH1蛋白的表达水平明显高于未经化疗的非小细胞肺癌患者和正常对照人群,三组阳性率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).利用shRNA构建稳定下调IDH1的细胞株,MTT显示A549细胞中下调IDH1表达后,顺铂和紫杉醇对其抑制能力增强,使得细胞对顺铂和紫杉醇敏感性升高.结论 IDH1在非小细胞肺癌对化疗药物的敏感性中起重要作用,其高表达可能导致肺癌对化疗耐受及差预后.
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不同病理类型和级别胶质瘤细胞IDH1基因突变情况分析
目的 探讨国人不同病理类型和级别胶质瘤细胞中异柠檬酸脱氢酶1 (IDH1)基因突变情况及其临床意义.方法 应用mIDH1 R132H免疫组化学法检测87例国人不同病理类型和级别的胶质瘤标本中IDH1基因突变发生率,分析不同病理类型、不同WHO级别和不同年龄的IDH1基因突变情况.结果 87例国人胶质瘤标本中有45例(51.7％)检出ID H1基因突变,并与胶质瘤的病理类型、WHO分级以及年龄等具有相关性.结论 IDH1基因突变在WHOⅡ、Ⅲ级胶质瘤中的发生率较高,并在胶质瘤的发生、发展过程中起重要作用.
