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抑制未成熟同源蛋白增强子基因的表达对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨未成熟同源蛋白增强子(ERH)基因敲除对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响.方法 通过克隆有干扰ERH基因序列的慢病毒感染T24细胞,建立稳定的ERH基因抑制的T24细胞克隆,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测ERH mRNA的表达.通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法、克隆形成法和流式细胞术检测ERH基因敲除对细胞增殖和凋亡的影响.通过裸鼠皮下成瘤实验验证体内ERH基因敲除对T24细胞成瘤效果的影响.结果 转染慢病毒后,经qPCR检测,ERH基因敲除效果满意[敲除组ERH mRNA相对表达量为0.079±0.007,未经处理的T24细胞(ERH正常组)为1.006±0.126;t=12.72,P=0.0002].MTT实验结果提示,敲除ERH基因的T24细胞增殖能力减弱[ERH敲除组490 nm波长处吸光度(A490)值为0.13±0.00,ERH正常组为0.66±0.01;t=104.61,P<0.0001].克隆形成实验结果提示其克隆能力减弱[ERH敲除组克隆数为(10.5±1.2)个,ERH正常组为(196.4±4.0)个;t=73.63,P<0.0001].流式细胞术检测结果示细胞凋亡率增加[ERH敲除组凋亡率为(11.0±0.5)％,ERH正常组为(4.2±0.5)％;t=16.06,P<0.0001].裸鼠皮下成瘤实验活体成像结果显示,ERH敲除组肿瘤区域总荧光强度为(4.67±0.59)×1010μW/cm2,ERH正常组相应部位为(9.54±4.20)×1010μW/cm2,差异有统计学意义(t=3.64,P=0.0051);ERH敲除组肿瘤重量为(0.80±0.62)g,ERH正常组为(1.79±0.71)g,差异有统计学意义(t=3.33,P=0.0037).结论ERH基因敲除可以抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,促进其凋亡.
