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miRNA-34a调控ether-à-go-go1基因抑制骨肉瘤细胞增殖的体外研究
目的 检测miRNA-34a(miR-34a)对于骨肉瘤细胞增殖的影响及可能的调控机制.方法选择入骨肉瘤细胞株MG-63、Saos-2和人成骨细胞株hFOB 1.19以及穿刺活组织检查并经病理确诊的10例骨肉瘤和10例正常骨组织标本.采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-34a在各细胞株和组织中的表达.构建pcDNA/miR-34a真核表达载体并转染骨肉瘤MG-63、Saos-2细胞,采用CCK-8法、克隆形成实验和裸鼠成瘤实验分别检测转染pcDNA/miR-34a前后细胞增殖、生长和裸鼠肿瘤体积的变化.采用Western blot法检测转染pcDNA/miR-34a和miR-34a抑制剂miR-34a-2'-O-甲基反义核糖核苷酸(miR-34a-2'-O-Me)前后骨肉瘤细胞株中ether-à-go-go 1(Eag1)蛋白的表达.结果 与成骨hFOB1.19细胞和正常骨组织相比,miR-34a在骨肉瘤细胞株和组织中表达下调.CCK-8法检测结果示,在MG-63细胞中,空白对照组、阴性对照组和miR-34a转染组72 h细胞存活率分别为(40.05±4.82)％、(36.88±4.66)％和(26.24±6.22)％,96 h细胞存活率分别为(83.55±5.95)％、(80.13±4.48)％和(30.21±7.26)％,转染pcDNA/miR-34a后72、96 h分别与空白对照组及阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜ 0.001).Saos-2细胞中,空白对照组、阴性对照组和miR-34a转染组72 h细胞存活率分别为(46.45±8.15)％、(43.33±6.89)％和(26.81±3.17)％,96 h细胞存活率分别为(84.79±4.10)％、(80.14±3.11)％和(31.77±5.17)％,转染pcDNA/miR-34a后72、96 h分别与空白对照组及阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜ 0.001).克隆形成实验结果示,转染pcDNA/miR-34a后,骨肉瘤MG-63和Saos-2细胞克隆形成数分别为(24.40±2.71)、(30.40±4.94)个,均低于空白对照组[(83.40±3.29)、(85.00±3.32)个]和阴性对照组[(80.00±3.06)、(80.60±3.29)个](均P＜0.001).裸鼠骨肉瘤生长结果显示,从转染pcDNA/miR-34a后第21天起,miR-34a转染组裸鼠肿瘤体积小于空白对照组和阴性对照组,两者差异均有统计学意义(均P＜ 0.001).miR-34a表达上调可抑制骨肉瘤MG-63和Saos-2细胞中Eag1的表达,而miR-34a抑制剂可诱导骨肉瘤细胞株中Eag1的表达(均P＜ 0.001).结论 miR-34a作为抑癌基因可能通过调控Eag1的表达抑制骨肉瘤细胞增殖和生长,有望成为骨肉瘤治疗的新靶点.
